游兴文,王秀琴,王艳虹,杨敏,李鸿超,杨林青

    (1 濮阳市油田总医院妇产科,河南 濮阳 457001；2 濮阳市油田总医院病理科；3 许昌学院)

    宫颈癌是发病率位居女性生殖系统恶性肿瘤首位的一类妇科肿瘤，其病死率逐年升高且呈年轻化趋势[1]。我国也是宫颈癌的高发国家[2]。上皮间质转化(EMT)是指上皮细胞获得具备侵袭邻近组织的生物学特性，从而在肿瘤侵袭转移中发挥重要作用[3]。E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)等是EMT的重要标志性因子，在多种肿瘤中异常表达[4-6]。基因沉默技术通过调控基因表达，在转录或翻译水平上阻断特定基因的异常表达，可达到对特定基因的外源性表达调控，进而发挥治疗疾病的作用[7]。磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/PKB蛋白激酶(又称AKT)信号通路是一类在细胞内发挥促进细胞增殖、抑制细胞凋亡作用的细胞存活相关信号转导途径[8]。临床对于通过基因沉默干预相关基因表达和信号转导途径在宫颈癌EMT的研究已有部分报道[9-11]，但对于磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸肌醇-3-激酶(PIK3CA)基因沉默介导PI3K/AKT信号通路对宫颈癌EMT的影响却鲜有报道。本研究通过探究人宫颈癌组织和细胞中PIK3CA的表达，并通过细胞转染和基因沉默，确认PIK3CA基因沉默介导PI3K/AKT信号通路对宫颈癌EMT的影响，以期为宫颈癌病人的分子治疗方案提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1主要试剂与仪器 人宫颈癌细胞系HeLa(中国科学院上海生物研究所)，正常人宫颈鳞状上皮细胞CRL-2614(美国典型菌种保藏中心，ATCC)；DMEM培养基(Gibco公司，美国)；Lipofectamine 2000(Invitrogen公司，美国)；免疫组化抗体(Abcam，剑桥，英国)；Trizol和反转录试剂盒(宝生物工程有限公司，大连)；PCR引物(深圳华大基因有限公司合成)；蛋白质印迹(Western blot)抗体(abcam公司，英国)；化学发光后凝胶成像系统(北京六一凝胶成像仪)；Quantity One软件(BIO-RAD公司，美国)；噻唑蓝(MTT)和二甲基亚砜(DMSO)溶液(Sigma公司，美国)；酶标仪(BioTek公司，美国)；Annexin-V-FITC细胞凋亡检测试剂盒和碘化丙啶(PI)染料(Sigma公司，美国)；流式细胞仪(Coulter Corporation公司 ......