张羽森,张瑱,韩兆峰

    (1 郑州人民医院整形美容外科,河南 郑州 450000；2 郑州大学第一附属医院整形美容外科)

    皮肤损伤后成纤维细胞等修复细胞增殖加速和细胞外基质(ECM)大量合成是瘢痕疙瘩的病理学基础，但目前其发病原因及机制尚未完全明确[1]。DNA甲基转移酶1(DNMT1)是DNA甲基化过程中的一个重要分子。而DNA甲基化酶催化基因甲基化后可抑制基因转录及复制，导致基因相关的平衡失调，最终导致疾病发生[2]。DNMT1与纤维化及增生存在密切关系，尤其是细胞增殖和癌细胞存活[3]。但DNMT1与瘢痕疙瘩相关性研究尚未见报道。已有研究显示，瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)中DNMT1蛋白阳性表达率明显高于正常皮肤成纤维细胞，甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷可诱导体外培养的KFB凋亡，并抑制成纤维细胞因子DNMT1和TGF-β1表达，上调Smad7表达[4]。提示抑制基因甲基化有可能成为瘢痕疙瘩防治的新方法。因此，本文探讨沉默DNMT1表达对KFB增殖及侵袭能力影响，为该病治疗提供潜在靶点。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    1.1.1标本来源 瘢痕疙瘩标本取自2016年5月—2017年10月郑州人民医院整形美容外科手术切除病灶，共9例，取自前胸部3例，耳垂部5例，上臂1例。选择标准：病人无瘢痕疙瘩感染破溃及治疗史，无免疫抑制剂、糖皮质激素等用药史，无全身系统性疾病。样本采集均符合手术标准，病人均签订知情同意书，并得到医院伦理委员会批准。

    1.1.2试剂和仪器 RPMI 1640培养基、胎牛血清(FBS)、青霉素和链霉素均购自美国Gibco；BCA蛋白定量试剂盒购自美国Pierce；CCK8溶液购自上海碧云天公司；Transwell细胞培养板及Matrigel胶均购自美国BD；DNMT1、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)抗体均购自美国CST；酶标仪购自美国BIORAD ......