江鑫铭,李霄霞,赵春华

    (青岛大学基础医学院,山东 青岛 266071)

    间充质干细胞(MSCs)是一类具有高度自我更新能力、多向分化潜能、低免疫原性及重要免疫调节能力的多能成体干细胞[1]。因较易获取且易于分离提取，人脂肪间充质干细胞(hAMSCs)的临床研究较为广泛。由于MSCs在体外培养时，通常处于常氧状态中，即培养环境中氧气的体积分数为0.209左右，但是在自然生理条件下，体内环境中氧气的体积分数只有0.02～0.08，甚至更低。所以，研究低氧状态下的MSCs更有利于将来其临床应用。

    外泌体是由细胞分泌的来自细胞内多囊泡体的一种脂质双分子层组成的囊泡，是MSCs旁分泌作用和细胞间通讯的重要递质[2]。它们可以通过转移分子货物来影响受体细胞的功能，例如蛋白质、微小RNA(miRNA)和mRNA等[3-4]。与干细胞相比，源自MSCs的外泌体具有很多优点，例如更容易通过组织屏障，能减少排斥反应的风险[5]。

    巨噬细胞作为人体内重要的抗原呈递细胞和免疫调节细胞，在多种疾病中发挥重要作用[6]。巨噬细胞根据其不同的激活方式和发挥免疫功能方式，分为M1型和M2型。M1型巨噬细胞为促炎性的，M2型巨噬细胞为抑炎性的[7]。MSCs能调节巨噬细胞由M1型向M2型转化来减轻炎症反应以及加速损伤修复[8]。有研究表明，在硫酸葡聚糖诱导炎症性肠病小鼠模型中，腹腔注射MSCs可诱导 M2 型巨噬细胞产生从而明显改善结肠炎症[9]；在肾动脉狭窄损伤模型中，MSCs可以通过调控巨噬细胞表型改善肾功能[10]。本研究旨在探讨低氧状态下hAMSCs外泌体对巨噬细胞M1/M2分型的影响及其分子机制，为其将来应用于临床治疗奠定基础。现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 细胞和试剂

    本实验所用的hAMSCs来自于吸脂术病人术后废弃的脂肪组织(已经征得病人的知情同意)，经提取原代细胞后扩增所得。巨噬细胞RAW264.7为实验室自存细胞系。本实验所用的RPMI、高糖DMEM和DME/F12培养液均购自美国Hyclone公司；胎牛血清购自Ex-cell公司；青霉素、链霉素、总RNA提取试剂、胰蛋白酶、RIPA裂解液、抗体稀释液均购自新赛美公司；胶原酶P购自美国Roche公司；脂多糖(LPS)购自美国Sigma公司；逆转录试剂盒、SYBR Green Master Mix试剂盒购自上海翊圣公司；PBS缓冲液购自biosharp公司；直标抗体CD80、CD206购自美国BD公司 ......