杨槟伊,陈伟明,孙凌云,尉嘉斌,范煦,鹿洪亭

    (1 青岛大学医学部儿科学系,山东 青岛 266021； 2 胜利油田中心医院新生儿科； 3 青岛大学附属青岛市妇女儿童医院小儿外科)

    神经母细胞瘤(NB)是起源于神经嵴细胞的实体瘤，通常发生于肾上腺髓质，也可发生于颈、胸、腹和骨盆的交感神经节中，是儿童最常见的颅外实体瘤。NB在临床表现上具有异质性，能自发消退或进展和转移并对各种治疗具有耐受性[1]。micro-RNAs(miRNAs)是一类独特的非编码小RNA，在肿瘤细胞中高表达或低表达发挥癌基因或抑癌基因的作用，使细胞增殖和分化失去控制，导致肿瘤的发生发展[2]。miRNA可通过直接结合靶mRNA的3′非翻译区(3′-UTR)发挥其生物学功能[3]。已有研究显示，miR-17-5p在结直肠癌、胃癌、肺癌等多种恶性肿瘤中表达显著增高[4-6]，其在肿瘤发生发展过程中扮演着重要角色，但是其对NB细胞增殖及迁移的作用尚未有报道。SHI等[7]研究发现，张力蛋白同源物磷酸脂酶(PTEN)可作为miR-17-5p的有效靶点，通过调控其下游信号通路PI3K/AKT而抑制甲状腺癌细胞的增殖并诱导凋亡。本研究拟探讨miR-17-5p对NB细胞增殖、迁移的影响及其机制，以期为NB的治疗提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    人NB细胞SH-SY5Y细胞株由青岛大学医学研究中心儿科研究所提供。DMEM培养液购于美国Hyclone公司，BI胎牛血清购于上海逍鹏生物科技有限公司，miR-17-5p模拟物(mimic)和miR-17-5p抑制物(inhibitor)及二者阴性对照NC mimics和NC inhibitor均购于上海吉玛制药公司，转染试剂TransIntroTMEL Transfection Reagent购于北京全式金生物公司，RNA-easyTMIsolation Reagent试剂、逆转录和荧光定量PCR试剂购于南京诺唯赞生物科技公司，CCK-8试剂盒均购于美国MCE有限公司，Transwell小室购于美国Corning公司，实验相关蛋白PTEN、蛋白激酶B(AKT)、第473位的丝氨酸磷酸化AKT(p-AKT Ser473)抗体均购于美国CST公司，山羊抗兔IgG(二抗)、肌动蛋白(β-Actin)抗体均购于中国武汉赛维尔公司，BCA蛋白浓度测定试剂盒购于北京索莱宝科技有限公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1细胞培养、转染和分组 SH-SY5Y细胞用含体积分数0.10胎牛血清的DMEM培养液 ......