韩晶晶，董晓雷，杨方浩，刘国祥，杨丽娜，李冰

    (青岛大学基础医学院遗传学与细胞生物学系,山东 青岛 266071)

    宫颈癌是女性最常见的癌症[1]。尽管近年来宫颈癌病人早期诊出率和治疗存活率都明显增高，但晚期宫颈癌病人的预后和治疗效果仍然不甚理想。确诊和死亡病人中超过 85%发生在包括中国在内的发展中国家，宫颈癌的晚期转移是导致病人死亡的主要原因。人宫颈癌HeLa细胞相比于其他癌细胞，增殖与转移异常迅速[2]。研究表明，转化生长因子β(TGF-β)在癌症晚期可以诱导癌细胞增殖和迁移等众多反应[3]。C-藻蓝蛋白(C-PC)是从螺旋藻中分离出的天然蛋白[4]，具有抗肿瘤[5]、抗炎症[6]和增进机体免疫力等作用。WANG等[7]通过构建C-PC/CMC-CD59sp 纳米颗粒，将C-PC高效转运至癌细胞内发挥杀伤作用。本研究以TGF-β1诱导的HeLa细胞作为研究对象，探讨C-PC抑制宫颈癌HeLa细胞增殖迁移活性的作用机制，为C-PC在临床上的应用提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    人宫颈癌HeLa细胞株受赠于青岛大学附属医院。试剂级C-PC粉末购于中国台州宾美生物技术有限公司；胎牛血清(FBS)购于以色列BI生物科技公司；DMEM高糖培养液购于美国Hyclone公司；青链霉素混合液购于苏州新赛美生物科技有限公司；PBS购于山东思科捷生物技术有限公司；重组人TGF-β1购于美国Peprotech有限公司；1 g/L结晶紫购于索莱宝公司；CCK-8试剂盒、BCA试剂盒及反转录试剂盒购自Biosharp白鲨生物科技公司；抗人E-cadherin、N-cadherin、Vimentin一抗购自美国Cell Signaling Technology公司；HRP标记的二抗购自南京巴傲德生物科技有限公司；ECL试剂盒购自上海雅酶生物科技有限公司；RNA提取试剂盒购自山东思科捷生物技术有限公司；PCR引物购自上海生工生物工程有限公司；qPCR试剂盒购自赛维尔生物科技有限公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1细胞培养及分组 HeLa细胞加入含体积分数0.10胎牛血清及体积分数0.01青链霉素混合液的DMEM高糖培养液，恒温培养箱中培养，培养箱内温度为37 ℃、含体积分数0.05 CO2、95%的相对饱和湿度。当细胞培养至融合度达到80%～90%时进行细胞传代，传至2～3代时，取处于对数生长期且生长状态良好的细胞进行实验。实验分为4组，每组设置3个复孔 ......