孙永红,别俊,何群育,郭奇遇

    (南充市中心医院,四川 南充 637000 1 肿瘤科； 2 口腔科)

    食管癌侵袭性强，男性的估计发病率是女性的3倍，总体5年生存率仅为20%左右[1]。因此，仍需要探索有效筛查、诊断和治疗食管癌的新方法。长链非编码RNA(LncRNA)是一种单链不具有编码蛋白质功能的RNA，其长度在200～100 000 nt之间[2]，如ELFN1-AS1、FAM83A-AS1等均可促进食管癌的进展[3-4]。转录因子7样蛋白2(TCF7L2)是Wnt信号通路的关键分子，并可以调控β连环蛋白1(CTNNB1)的转录[5]，研究已经发现TCF7L2-SATB1通路与食管癌病人不良预后有关[6-7]。环氧化酶-2(COX-2)是一种蛋白酶，研究表明约有82%的食管癌组织表达COX-2，并且参与食管癌的起源和发展[8]。前期研究发现的一种新型的LncRNA TMEM9B-AS1，主要在结肠和肾脏表达[9]。但是，其对食管癌的影响和作用机制尚不清楚，目前仍无相关报道。因此，本研究旨在探讨TMEM9B-AS1在体外对食管癌细胞侵袭和增殖能力的影响，以及介导TCF7L2-SATB1途径对食管癌细胞COX-2和CTNNB1蛋白表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    人食管癌细胞KYSE510(ATCC?CRL-9609)以及96孔和24孔组织培养板(康宁公司，美国)，DMEM培养液(Gibco公司，美国)。TMEM9B-AS1过表达、沉默质粒以及相应的阴性对照(NC)(吉玛公司，中国)，Lipofectamine?2000(Invitrogen公司，美国)。Trizol试剂(Aidlab公司，中国)，RNAspin Mini试剂盒(GE Healthcare，美国)，BestarTMqPCR试剂盒(DBI Bioscience公司，德国)，PCR仪(ABI7900，ABI公司，美国)。一抗以及山羊抗免疫球蛋白G(IgG)二抗(1∶1 000稀释，#ab6721，美国Abcam公司)，PVDF膜(Bio-Rad公司，美国)，ECL 显色试剂盒(Thermo Fisher公司，美国)，Matrigel胶和Transwell装置(Corning公司，美国)。光学显微镜(Carl Zeiss公司，德国)。

    1.2 实验方法

    1.2.1细胞培养、分组和转染 将KYSE510细胞培养在DMEM完全培养液中 ......