马晏然,杨茜,李宏,宋京芝,周璇,项锋钢,

    (青岛大学,山东 青岛 266071 1 基础医学院病理学系； 2 附属医院病理科)

    肝细胞肝癌(HCC)是发展中国家最常见的原发性肝癌类型，主要由病毒感染引起[1]。在我国，其病死率仅次于胃癌[2]。根治性切除术是HCC的主要治疗方式，但HCC病人术后有较高的复发转移率，预后不理想[3-4]。表观遗传修饰的调节及不同信号转导通路的交叉作用导致HCC发生发展的机制极其复杂[5-7]。因此，探讨HCC发生发展的分子机制，寻找影响其发生、发展及判断其预后的分子标志物将具有重要意义。细胞周期蛋白A1(CyclinA1)参与细胞周期循环的调控，在维持细胞有序的增殖和分裂活动中起作用[8]。研究表明，CyclinA1在多种恶性肿瘤中异常表达，并提示预后不良[9-10]。但是CyclinA1影响HCC发生发展的研究相对较少。有研究显示，CyclinA1在HCC组织中异常表达，通过抑制细胞凋亡，有利于肿瘤形成[11]。本研究通过检测CyclinA1在HCC中的表达，探讨CyclinA1与HCC病人临床病理特征及预后的关系，为HCC的临床治疗提供新的靶点。

    1 资料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1标本收集 收集青岛大学附属医院2014—2016年手术切除的HCC石蜡包埋标本284对，包括HCC及其相应癌旁非瘤组织(距肿瘤边缘>5 cm)，病人男244例，女40例；年龄32～83岁，平均(57.4±9.7)岁；病人临床病理资料均完整，术前均未接受放、化疗。HCC病人通过电话与住院复查结合的方式随访，随访截止日期为2021年7月31日，共有251例随访满5年且资料完整，分析其术后生存时间。选取2020年12月—2021年1月手术切除、立即冻存于液氮中的9对新鲜HCC及相应癌旁非瘤组织(距肿瘤边缘>5 cm)。本研究经青岛大学附属医院伦理委员会批准。

    1.1.2主要试剂 CyclinA1鼠抗人单克隆抗体购自美国安迪科技公司，免疫组织化学工作浓度1∶100，Western blot工作浓度1∶1 000；Trizol裂解液、RIPA裂解液、PV6000免疫组织化学检测试剂盒、BCA蛋白检测试剂盒、PAGE凝胶快速制备试剂盒、ECL发光液均购自北京索莱宝科技有限公司；PrimeScriptTM逆转录试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；SYBR PremixEx TaqTMⅡ荧光定量试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司 ......