马晓涵,韩滨,高凡,迟松

    (青岛大学附属医院神经内科,山东 青岛 266003)

    阿尔茨海默病(AD)是一种以进行性认知障碍、记忆减退和精神行为症状为主要临床特征的神经退行性疾病,其致残率高,病程较长,目前尚无有效的防治策略[1]。AD的发病机制存在多种假说,其中β-淀粉样蛋白(Aβ)激活小胶质细胞的炎症反应被认为在AD的发病过程中起着关键作用[2-3]。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体是由NLRP3受体、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)组成的多蛋白复合体[4],在中枢神经系统中主要表达于小胶质细胞[5]。研究表明,NLRP3 炎性小体可被Aβ激活,进而促进Aβ的沉积和微管蛋白tau 的过度磷酸化[6-9]。此外,NLRP3 炎性小体的激活能够触发小胶质细胞的焦亡,这是一种新的程序性的细胞死亡形式,表现为细胞不断肿胀直至细胞膜破裂,释放大量炎性递质,加剧神经炎症反应[10]。

    氟西汀是一种选择性的5-羟色胺再摄取抑制剂,在临床上广泛应用于抑郁症的治疗。最近的研究发现,氟西汀能够通过抗炎、抗氧化应激发挥神经保护作用[11-12]。在抑郁动物模型中,氟西汀能通过下调 NLRP3 信号通路抑制小胶质细胞的活化和炎性因子的分泌[13-14]。尽管研究发现抗抑郁药的长期应用能够降低AD 罹患风险并改善认知能力[15-17],但是氟西汀能否抑制AD环境下小胶质细胞焦亡和神经炎症目前尚无报道。本研究使用Aβ25-35刺激 BV2 小胶质细胞模拟AD炎性环境,以NLRP3炎性小体与细胞焦亡为切入点,探讨氟西汀对AD的保护作用及其潜在机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    永生系小鼠BV2小胶质细胞购于武汉普诺赛公司。氟西汀购于美国Sigma公司。Aβ25-35、双硫仑和CCK8检测试剂盒购于美国MCE公司;胎牛血清、青链霉素混合液以及MEM培养液购自武汉普诺赛公司;BCA蛋白检测试剂盒、Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒、白细胞介素1β(IL-1β)及白细胞介素18(IL-18)的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒、山羊抗兔二抗、山羊抗鼠二抗购自武汉伊莱瑞特公司;乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒购自北京索莱宝公司;PBS缓冲液、RIPA裂解液和DCFH-DA活性氧(ROS)检测试剂盒购自上海碧云天公司;ECL试剂盒购于武汉博士德公司;caspase-1抗体购于美国Santa cruz公司;NLRP3、ASC和活化半胱氨酸蛋白酶-1(cleaved-caspase-1)抗体购于美国CST公司;GAPDH和膜穿孔蛋白D(GSDMD)抗体购自美国Proteintech公司 ......