王晓娅,施春英,宋思奇,李玲

    (青岛大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系,山东 青岛 266071)

    先天畸形、严重创伤或肿瘤等往往会导致膀胱结构缺失及功能障碍,需要行膀胱重建手术才能恢复其结构和功能。目前,自体胃肠道是膀胱重建术最常用的重建材料,但该手术术后伴随多种并发症,如酸碱代谢紊乱、黏液分泌、结石等[1-2]。因此,探索新的膀胱重建材料具有重要的临床意义。膀胱脱细胞基质(BAM)是良好的膀胱再生修复材料,可为组织再生提供一定的力学支持,还可为细胞的生长、黏附、迁移提供支架[3]。前期研究证实,靶向碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)可特异性与胶原材料结合,促进大鼠、狗等临床前动物膀胱的再生修复[4-5],但其重建膀胱中心区的平滑肌再生及膀胱功能仍不足。研究表明,尿源干细胞(USCs)更易于向膀胱上皮及膀胱平滑肌组织分化,是组织工程膀胱良好的理想种子细胞[6-9]。本文对靶向bFGF、USCs复合BAM支架对损伤膀胱的再生能力的影响进行了研究。现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    SD雄性大鼠(体质量为200～260 g,8～10周龄),购于北京维通利华实验动物技术有限公司,饲养于青岛大学医学部实验动物中心。REGM添加剂以及RE细胞基础培养液均购自Lonza公司;高糖DMEM培养液购自HyClone公司;胎牛血清以及GlutaMAX均购自Gibco公司;非必需氨基酸购自Procell公司;青霉素、链霉素、bFGF、EGF以及PDGF-AB购自Peprotech公司;抗α-SMA兔单克隆抗体、抗-vWF兔单克隆抗体以及山羊抗兔多克隆二抗购自Abcam公司;抗-Desmin兔单克隆抗体购自Proteintech公司;抗-CD31兔单克隆抗体购自Abclone公司;抗荧光衰减封片剂(含有DAPI)购自中杉金桥;40 g/L多聚甲醛固定液和磷酸盐缓冲液(PBS)粉末购自Solarbio公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1BAM的制备 无菌条件下取猪的膀胱,PBS清洗,分别经5 g/L的SDS、体积分数0.01的TritonX-100及DNA酶/RNA酶处理24 h,无菌纯净水清洗72 h,冻干制备BAM支架材料,钴60辐照灭菌 ......