张飒飒,鲁叶慧,熊翌宏,杨珊珊,吴媛,彭旭东

    (1 青岛大学附属医院眼科,山东 青岛 266003; 2 湖北医药学院药护学院)

    烟曲霉菌是一种常见的真菌性角膜炎的致病真菌[1],可黏附于角膜上皮从而免于宿主的免疫清除[1-2]。真菌感染时,各种免疫细胞在真菌清除方面发挥重要防御作用[3-4];但是其引发的过度炎症反应会加重组织损伤[5-6]。目前临床除了常用药物外[7],还需要寻找安全高效的抗炎药物实现抗真菌联合免疫治疗。阿魏酸(4-羟基-3-甲氧基肉桂酸, FA)是一种酚类化合物,可溶于二甲基亚砜(DMSO),它具有抗炎[8-9]、抗氧化[10]、肝脏保护[11]等功效。LAMPIASI等[12]研究发现,FA在脂多糖(LPS)刺激的小鼠RAW264.7细胞中发挥抗炎作用。最近CAO等[8]研究发现,FA可降低促炎因子表达,改善肝损伤的预后,在乙醇性肝损伤中起保护作用[13]。本研究旨在探讨FA在烟曲霉菌诱导的炎症中的抗炎作用,为真菌性角膜炎的治疗提供新思路。现将结果报告如下。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    人角膜上皮细胞(HCEC)由厦门眼科实验室馈赠,将其接种到10 cm细胞培养皿中,在含有体积分数0.10 胎牛血清的DMEM培养基中培养(37 ℃,含体积分数0.05 CO2培养箱)。烟曲霉菌(CPCC 3.0772)购自中国微生物菌种保藏中心(SGMCC);FA(100 mg,纯度98%)由麦克林试剂公司提供,用体积分数0.001的DMSO溶解后以100 mmol/L储备液存放于-80 ℃;RNAex pro reagent裂解液由艾科瑞生物公司提供;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒由Biolegend公司提供;HiScript Ⅲ RT SuperMix(南京诺唯赞生物公司)。

    1.2 实验方法

    1.2.1烟曲霉菌丝制备 将烟曲霉菌接种到沙氏液体培养基中培养48～72 h(37 ℃,含体积分数0.05 CO2培养箱),待培养基中覆盖白色绒毛团块状菌落,将菌落转移至玻璃研磨棒中研磨至匀浆状态,加入体积分数0.75乙醇灭活(4 ℃,48 h)后得到灭活烟曲霉菌丝,使用血细胞计数器计数并调整菌丝浓度至1×1011CFU/L后用于体外细胞实验 ......