孙琳,王炳超,朱天立

    (青岛大学基础医学院生理学教研室,山东 青岛 266071)

    阿尔茨海默病(AD)是一种以记忆丧失、认知障碍以及痴呆的行为和心理症状为特征的神经退行性疾病[1-2]。β淀粉样蛋白寡聚体(oAβ)在细胞内蓄积和神经元过度兴奋是 AD早期的两个重要事件[3]。oAβ的主要形式为oAβ1-40和oAβ1-42,并且后者的毒性最强。对AD神经元功能障碍和毒性的最早解释之一是由ARISPE等[4]提出的通道假说,该假说假设不受调控的β淀粉样蛋白(Aβ)离子通道会导致离子稳态的丧失(主要是通过升高细胞内钙离子),最终触发神经元功能障碍和细胞死亡[5]。二苯基吡唑化合物Anle138b是一种低聚物调节剂,其毒性低,口服生物利用度高,血-脑脊液屏障通透性好[6]。Anle138b能够阻断Aβ通道并挽救淀粉样变性小鼠模型的疾病表型,是治疗AD非常有希望的新型药物,但是该药在原代海马神经元的细胞模型上研究较少。本研究应用单细胞膜片钳技术检测自发性兴奋性突触后电流(sEPSCs),分析Anle138b对慢性oAβ1-42诱导的海马神经元细胞突触毒性作用影响,为AD新型药物的开发提供可行的思路。现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1实验动物 选择出生24 h之内的SD乳鼠40只,由青岛大任富城畜牧有限公司提供。

    1.1.2主要实验试剂及仪器 葡萄糖酸钾、二甲基亚砜(DMSO)、KCl、NaCl、MgCl2、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)、Mg2ATP、NaGTP以及KOH均购自美国Sigma公司;DMEM/F12培养基、胰蛋白酶购自美国Hyclone公司;青霉素-链霉素购自中国北京索莱宝科技有限公司;B27无血清添加剂购自美国Gibco公司;Anle138b、人源Aβ1-42粉末、六氟异丙醇(HFIP)、荷包牡丹碱(Bicuculline)均购自中国MCE公司;CO2细胞培养箱;玻璃微电极拉制仪;防震台;三维微操纵器;膜片钳放大器;倒置荧光显微镜 ......