彭修法,王蕊红,王晔,刘凤娟,张春玲

    (青岛大学附属青岛市中心医院,山东 青岛 266042 1 呼吸与危重症医学科; 2 检验科)

    2021年的统计数据显示,肺癌位居全球癌症相关死因之首,每年因肺癌死亡的人数达180万,我国每年肺癌新发及死亡病人分别占全球的37.0%和39.8%[1-2]。肺癌主要分为非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌两种类型,其中NSCLC占总数的85%左右,NSCLC中又以肺腺癌最常见[3]。除常规的放疗、化疗以及手术治疗等手段外,近年来靶向及免疫治疗获得长足发展,使肺腺癌病人生存有了明显改善,但晚期病人5年总生存率仍不足20%[4]。因此,仍需继续探究肺腺癌发病机制,寻找新的治疗靶点。据报道,近来作为研究热点的m6A转录后修饰在肿瘤发生发展中发挥重要作用[5-7]。我们前期生物信息学研究发现,m6A相关修饰酶甲基转移酶样蛋白5(METTL5)在肺腺癌组织中高表达,并且其表达水平与病人总生存率呈负相关。本研究旨在进一步研究METTL5在肺腺癌中的可能作用,探讨METTL5对肺腺癌细胞迁移、侵袭的影响及相关机制,从而为肺腺癌治疗提供新的靶点。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    肺腺癌A549和H1975细胞系均购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。无血清1640培养液(RPMI-1640)购自Gibco公司;胎牛血清(FBS)购自Excell公司;磷酸盐缓冲液(PBS)购自索莱宝公司;青链霉素混合液、2.5 g/L胰蛋白酶溶液购自Hyclone公司;一步冻存液购自海星公司;2×蛋白上样缓冲液(2×loading buffer)、电泳转移缓冲液(即转膜液)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液、TBST缓冲液购自Solarbio公司;40 g/L多聚甲醛固定液、结晶紫染液购自碧云天公司;Matrigel基质胶购自美国Corning公司;Anti-human METTL5多克隆抗体、HRP标记的羊抗兔IgG购自武汉爱博泰克公司;兔抗人E-Cadherin、Vimentin、GAPDH抗体购自美国Cell Signaling Technology公司;METTL5的干扰慢病毒购自上海吉玛公司 ......