马亿江,丁晓倩,隋爱华,杨晓晖,曹艺巍,林存智

    (青岛大学附属医院,山东 青岛 266555 1 呼吸与危重症医学科; 2 医学研究中心)

    在中国,肺癌是最常见的癌症事件,也是癌症死亡的主要原因[1-2]。光动力疗法(PDT)作为一种有前景的、非侵入性的癌症治疗方式,在近几十年广泛用于肺癌的治疗。PDT由3个基本成分组成,即光、氧和光敏剂(PS)[3-4]。血卟啉衍生物(HPD)存在化学纯度低、组织穿透性差、半衰期长等缺点,但到目前为止仍是最常用、且是唯一一种被FDA批准用于多种实体恶性肿瘤临床治疗的PS[5-6]。PS的细胞摄取、胞内分布是决定PDT功效的重要因素[7]。实体肿瘤由多种具有不同PS摄取特性的细胞组成。因此,细胞水平的药代动力学是优化PDT效果的一个重要参数[8]。本实验以人支气管上皮BEAS-2B细胞作对照,选取3种肺癌细胞系如人肺腺癌A549、人肺鳞癌H520、人肺小细胞癌H446细胞进行研究,在体外通过多功能酶标仪、流式细胞仪、激光扫描共聚焦显微镜等仪器检测细胞内荧光强度,比较分析HPD在4种细胞内的摄取、定位差异,以期为针对不同的肺癌类型选取特定方案(特定的PS注射浓度和时间)来增强HPD介导的PDT疗效提供一定的指导。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂

    HPD由重庆迈乐生物制药有限公司生产,规格为5 mL:25 mg;在超净工作台分装后于-20 ℃冰箱避光保存,用含体积分数0.10胎牛血清和体积分数0.01青霉素/链霉素双抗溶液的DMEM高糖完全培养液现配现用。DMEM高糖培养液、胰蛋白酶、青霉素/链霉素双抗溶液及40 g/L多聚甲醛固定液均购于大连meilunbio公司,胎牛血清购于武汉Procell公司,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)、抗荧光淬灭封片液购于北京Solarbio公司。

    1.2 细胞培养

    人肺腺癌A549细胞系购于美国菌种保藏中心(ATCC),人支气管上皮BEAS-2B细胞系、人肺鳞癌H520细胞系、人肺小细胞癌H446细胞系均购于武汉Procell公司,于青岛大学附属医院中心实验室液氮罐中保存。4种细胞系均使用含体积分数0.10胎牛血清和体积分数0.01青霉素/链霉素双抗溶液的DMEM高糖完全培养液,于37 ℃、含体积分数0.05 CO2的饱和湿度孵箱中培养 ......