龚 勇

    (长治市卫生学校，山西 长治 046000)

    在机体免疫系统与肿瘤细胞相互对抗的过程中，被激活的T细胞与NK细胞分泌的IFN-γ具有直接抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤血管生成、调控表面肿瘤细胞的Fas/FasL表达等多种抗肿瘤作用。作为一种重要的双向免疫调节因子，IFN-γ与免疫的激活和抑制都着密切的联系。IFN-γ不仅能上调机体内树突状细胞的吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)表达[1]，而且能够诱导许多肿瘤细胞的IDO表达，如骨肉瘤、上皮恶性肿瘤细胞和肺纤维细胞等[2]。而IDO在肿瘤免疫逃逸中起着极其重要的作用[3]。本研究旨在观察IFN-γ对胰腺癌细胞株Panc02中IDO表达及活性的影响，为深入了解胰腺癌免疫逃逸机制提供实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    RPMll640培养基、胎牛血清购自美国Hyclone公司，重组鼠γ干扰素(IFN-γ)购自美国Pepro Tech公司，BCA试剂盒、PVDF Transfer Membranes购自美国Pierce公司，Bradford蛋白定量试剂盒购自南京建成生物工程研究所，辣根酶标记山羊抗兔IgG购自北京中杉金桥公司，Super ECL Plus超敏发光液购自普利莱基因技术有限公司，预染低分子量蛋白质Marker购自Solarbio公司，Actin(1-19)购自 SANTA CRUE，氨基酸色柱购自天津四友公司，犬尿氨酸标准品、内标3-硝基酪氨酸标准品购自中国药品生物制品检定所，胰腺癌细胞株Panc02购自美国ATCC公司。

    1.2 实验分组及方法

    按每个培养瓶为一个处理对象，随机分为4个处理组:空白对照组(IFN-γ 0U/mL)和 IFN-γ 10 U/mL、20 U/mL、50 U/mL组。待细胞生长至60%汇合时，IFN-γ处理组分别加入终浓度为10 U/mL、20 U/mL、50 U/mL的IFN-γ，空白对照组加入等量PBS，继续培养18 h，收集半贴壁细胞，并抽提细胞胞浆蛋白进行Western Blot分析以观察各组IDO的蛋白表达。每组样本例数均为6例。

    1.3 Western blot检测 IFN-γ作用胰腺癌细胞株Panc02后IDO蛋白的表达

    采用胞质胞核蛋白抽提试剂盒 ......