山西中药大枣的嫩叶总DNA 提取方法的研究
凝胶电泳,琼脂糖,离心管,1材料与方法,2方法,3DNA检测方法,2结果,1紫外分光光度计DNA检测,2琼脂糖凝胶电泳DNA检测(0.8%琼脂糖凝胶电泳),3讨论
张 琰,宋金玉(山西药科职业学院,山西太原 030031)
我国枣树种质资源极为丰富,《中国果树志枣卷》中记载的枣树品种就有700 多个。之前我国学者在枣树栽培、良种选育、快速繁殖方面研究较多,但是如何将繁多的品种进行鉴别分类以便种质更好的保存是当前枣树种质资源研究的重点。近十几年来国内外迅速发展起来的分子标记技术如AFLP 技术(扩增片段长度多态性)是枣树品种鉴定的有效方法,既具有PCR 的高效性、安全型和方便性的特点,又具有RFLP 可靠性好,重复性高的优点,被广泛用于植物科学研究的各个方面[1]。不同的DNA 提取技术对AFLP 的试验影响非常大,本文对枣树叶片DNA 的提取进行了试验研究,旨在为后续枣树叶片AFLP 体系的建立做好准备,同时也为枣树资源品种分类、鉴别奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
植物:试验所用材料为交城骏枣幼嫩叶片、太谷壶瓶枣幼嫩叶片、运城梨枣幼嫩叶片,均采自于山西临猗枣树研究所。叶片采集后立即放置于密封袋中,用冰盒带回实验室。然后置于冰箱冷冻室-80℃保存。
主要仪器:台式高速离心机:TGL-16G 型(上海医用分析仪器厂);电泳仪:HV-3000 型高压稳压电泳仪(北京东方仪器厂);干燥箱:熊猫牌DGF20 型电热鼓风干燥箱(南京实验仪器厂);凝胶成像系统:TMW-20 Transilluminator(美国,DELL);DNA 混合仪(宁波新芝科器研究所);TU-1810 紫外可见分光光度计;移液枪、恒温水浴锅等。
试剂:昆明晨致远绿有限公司生产的快捷型植物基因组DNA 提取系统试剂盒、氯仿溶液、异戊醇溶液、异丙醇、RNase、CTAB 缓冲液、3.5mol/L 的NaAc 溶液、70%乙醇、无水乙醇等 ......
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