吴家媛，马欣荣，唐 琳，张绍伟，管晓燕，洪献忠，吴志刚，张 剑，梁文红，刘建国

    (1.遵义医学院附属口腔医院，贵州遵义563003；2.中国科学院成都分院生物研究所，四川成都610041)

    随着分子生物学技术的飞速发展,通过基因工程改造的转基因植物已成为一种新型的生物反应器,细菌或病毒等病原体的抗原基因可在转基因植物表达系统中表达，且表达的抗原仍较好地保留了天然的免疫原性[1]。龋病是多因素共同作用的结果,其中变异链球菌在牙面的粘附和聚集是龋病发生的首要条件，其表面蛋白抗原PAc被认为是变异链球菌的主要毒力因子之一，A区为其氨基端富含丙氨酸的重复序列，是表面蛋白抗原发挥粘附功能重要功能区，含有B细胞和T细胞的抗原表位，不仅与粘附表位重叠而且是重要的免疫活性区[2]。本研究用已在大肠杆菌中正确表达的变异链球菌表面蛋白的A区和霍乱毒素B亚单位的融合基因作为目的基因，经中间载体介导与植物表达载体相连，构建高效植物表达载体，以期增强转基因植物中抗原蛋白的免疫应答反应。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株及质粒 大肠杆菌菌株JM109，根癌农杆菌菌株EHA105；质粒pCAMBIA2301；中间载体pBPC55(北京市农林科学院张晓东博士馈赠)；质粒pEAC10：含有变异链球菌表面球蛋白(PAc)A区与霍乱毒素亚单位(CTB)的嵌合基因pacA/ctxB(遵义医学院龋病研究室提供)。

    1.1.2 试剂 卡那霉素，利福平由荷兰Duchefa公司生产；限制性核酸内切酶，T4连接酶，胶回收试剂盒，Taq DNA聚合酶及碱性磷酸化酶CIP等购自大连宝生物公司 ......