重组人IL-10在毕赤酵母X-33及SMD1168中表达效率的比较
免疫学,培养液,宿主,1材料与方法,2结果,3讨论
陈富超,曹明燕,罗军敏,封建凯,孙万邦(遵义医学院免疫学教研室暨贵州省免疫学研究生教育创新基地,贵州 遵义563000)
人IL-10(Human interleukin-10,hIL-10)是由多种细胞产生的细胞因子,活性形式通常是由非共价键连接两个单体而形成的同源寡二聚体,分子量为39kD,酸性条件下不稳定。不同宿主表达的重组hIL-10(rhIL-10)由于糖基化程度不同,分子量在35~40kD之间,说明不同宿主表达的IL-10在结构和功能上会有差异。毕赤酵母为真核生物,用于表达外源蛋白有诸多优点[1],但不同酵母的微生物学特性各异,也决定了外源蛋白在其中的表达水平参差不齐。目前,国内外为临床试验和基础研究提供的IL-10产品大多数为大肠杆菌表达的rIL-10,其活性不稳定和副作用较明显,价格也较贵,限制了rhIL-10的应用。多数酵母表达外源蛋白的产量较低[2],为了进一步开发产量高、具有广泛用途的hIL-10生物制品,我们选择菌株X-33和SMD1168表达rhIL-10,以期找到合适hIL-10的表达菌株。
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
1.2.1 rhIL-10的诱导表达及分析鉴定分别挑取重组酵母pPICZA-hIL-10/X-33、pPICZA-hIL-10/SMD1168形成的单个菌落接种到BMGY培养液中 ......
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