张 锋，吴 芹，石京山，陆远富，刘 航，刘 杰

    (1.遵义医学院药理学教研室暨贵州省基础药理重点实验室，贵州 遵义 563099;2.遵义医学院药学院，贵州 遵义 563099)

    近年研究发现神经炎症反应在神经系统疾病的发生发展过程中起着非常重要的作用[1]，而小胶质细胞的激活被认为是神经炎症反应的关键所在[2]。因此，抑制小胶质细胞所介导的神经炎症反应将成为治疗神经系统疾病的重要靶点之一。化风丹(Hua Feng Dan，HFD)，创制于1644年，是世界上生产、销售时间最长的治疗脑部疾病的中成药。目前，化风丹在治疗中风偏瘫、癫痫、面神经麻痹、帕金森氏病、老年痴呆等脑部疾病有很好的疗效[3]。但是有关化风丹的中枢神经药理作用知之甚少，中外文献检索近乎空白。因此，本研究拟采用原代大鼠小胶质细胞培养，通过脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞激活引起神经炎症反应，观察化风丹对小胶质细胞介导的神经炎症反应的抑制作用，为其临床应用提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 Sprague-Dawley(SD)大鼠(第三军医大学大坪医院实验动物中心，许可证:SCXK2007-017)，♀♂兼用，体重200～250 g。

    1.1.2 药品及试剂 化风丹(贵州万胜药业有限责任公司);LPS(美国Calbiochem公司);细胞培养试剂(美国Invitrogen公司);一氧化氮(NO)检测试剂盒(江西碧云天生物技术研究所);酶联免疫吸附试剂盒(ELISA)(美国R＆D systems公司);Trizol、RNA纯化试剂盒以及所有引物(上海生工生物工程技术服务有限公司)。

    1.1.3 仪器设备 超净工作台(苏州精华设备公司);倒置相差显微镜(日本Nikon公司);CO2注入式电热恒温培养箱(美国Thermo Electron公司);96孔板清洗仪、酶标仪、PCR仪(美国BIO-RAD公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 原代大鼠小胶质细胞培养 无菌操作条件下取出出生后1 d的SD大鼠幼鼠的全脑，置于Dulbecco＇s minimum essential medium(DMEM)/F12 培养液中 ......