张 琳，邓胜利，姚 刚，喻 田

    (遵义医学院 麻醉系，贵州 遵义 563099)

    UrocortinⅠ对缺氧/复氧损伤心肌细胞钙离子的影响

    张 琳，邓胜利，姚 刚，喻 田

    (遵义医学院 麻醉系，贵州 遵义 563099)

    目的观察UcnⅠ对成年大鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞钙离子的影响。方法通过Langendorff离体心脏灌注系统，用Ⅱ型胶原酶逆行灌注法分离成年大鼠心肌细胞，培养20 h后随机分为正常组(N组)、缺氧/复氧组(I/R组)、UrocortinⅠ组(UcnⅠ组)、5-羟葵酸+UrocortinⅠ组(5-HD+ UcnⅠ组)。各处理组心肌细胞加入Fluo-3/AM荧光探针，用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙的荧光强度。结果I/R组心肌细胞内钙离子浓度较N组高(P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 清洁级成年SD大鼠,16～20wk，质量200～350 g，雌雄不拘,由第三军医大学提供( SCXK(军) 2007-017) 。

    1.1.2 主要试剂与仪器 Ⅱ型胶原酶(美国Gibco公司)；UrocortinⅠ、5-羟葵酸、EGTA、M199、BSA、层粘连蛋白(美国 Sigma公司)；Fluo-3/AMester(Biotium公司)，其他试剂为国产分析纯。SP2型激光共聚焦显微镜(莱卡公司，德国)，全自动数码成像与分析系统(GenGenius,Syngene,USA)，MPA离体心脏灌注装置ALC-B5恒流泵SIGO双通道灌注仪(上海)；二氧化碳培养箱(美国Forma)；纯水处理器(美国Millipore)。

    1.2 方法

    1.2.1 成年大鼠心肌细胞的分离与培养 利用Langendorff离体心脏灌注装置，成年大鼠心肌细胞的分离与培养参照文献[3]的方法并加以改进,主要步骤如下：大鼠腹腔注射3﹪戊巴比妥钠40 mg·kg-1、肝素50U·kg-1麻醉与肝素化；迅速开胸取出心脏，放入预冷的750 μM Ca2+液(4 ℃)中轻柔挤压心脏2～3次；后迅速将主动脉根部固定于Langendorff灌注管口(设置灌注流量为 9 mL/ min/ g 心脏)；37℃下分别依次逆行灌注充氧的750 μM Ca2+液、无Ca2+EGTA液、Ⅱ型胶原酶液 ......