陈小燕，廖永美，赵 逵

    (遵义医学院附属医院消化内科，贵州遵义 563099)

    结直肠癌是胃肠道中最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率逐年增高，发病年龄也明显提前。结直肠癌组织中一小部分具有自我更新的能力，并在肿瘤的发生、生长和转移中起重要作用的细胞被称为肿瘤干细胞，是肿瘤根治的靶点。Lgr 5是最新发现的Wnt通路的靶基因，Lgr 5蛋白是肠道干细胞标志物[1]，在结直肠癌中高表达，与结直肠癌的发生与发展密切相关[2]，可能作为一个潜在的治疗靶点。阿司匹林作为一种临床常用的非甾体抗炎药(NSAIDs)，除具有解热镇痛抗炎作用外，研究表明它还可以降低腺瘤和结直肠癌发生的风险，有效预防结直肠癌发生[3]。近年来大量流行病学和实验室研究均表明NSAIDs能抑制甚至逆转结直肠癌癌前病变。阿司匹林抗肿瘤作用可能是通过COX-2途径实现，NSAIDs能降低结直肠癌前腺瘤及癌组织中COX-2表达，抑制肿瘤生长。然而并非所有结直肠癌均表达COX-2，对此类COX-2阴性表达的肿瘤细胞，NSAIDs的作用如何研究尚少。此外，阿司匹林是如何作用于结直肠癌干细胞，对肿瘤干细胞标志物Lgr 5又有何影响，Lgr 5与COX-2之间有何联系，都尚不清楚。本研究拟通过阿司匹林对人结肠癌细胞株COX-2高表达的HT -29、COX -2 阴性表达的 SW -480[4]中肿瘤干细胞标记物Lgr 5表达影响的研究，探讨阿司匹林预防结直肠癌发生的可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株 人结肠癌细胞株HT-29购于中科院上海细胞库，人结肠癌细胞株SW-480购于重庆医科大学细胞实验室。

    1.1.2 药物和主要试剂 阿司匹林、McCoy’S 5a培养基及胰蛋白酶购自美国Sigma公司，胎牛血清购自美国Hyclone公司，兔抗人Lgr 5多克隆抗体购自美国Abcam公司，小鼠抗人β-actin、辣根酶标记山羊抗兔IgG及辣根酶标记山羊抗小鼠IgG购自北京中杉金桥公司，BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)以及RIPA裂解液购自武汉博士德公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞的培养 人结肠癌细胞株HT-29、SW480培养于含10%胎牛血清的McCoy’S 5a培养基，置于37℃、5%CO2的培养箱中常规培养，待细胞贴壁生长至80% ～90%融合时，用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合液进行消化传代。细胞生长状态良好、处于对数期时用于实验。

    1.2.2 Western blot检测结肠癌细胞系株 HT-29、SW-480细胞中Lgr 5蛋白的表达 将HT-29、SW480细胞以每瓶5×105个细胞接种于50 cm2的组织培养瓶中 ......