蒋程程，邓金勇 ，宋庆高，何 苇 ，陈 尚

    (遵义医学院附属口腔医院口腔颌面外科，贵州遵义 563099)

    骨膜牵张成骨(periosteal distraction osteogenesis，PDO)是一种通过诱导骨膜间充质干细胞分化为成骨细胞后进而获得新生骨的缓慢生物学过程，但这种成骨方法不同于牵张成骨技术，PDO不需截骨术或骨皮质切开术，仅是对骨皮质表面的骨外膜进行牵张[1]。目前可通过多种方法来对实验成骨效果进行评估，如超声波检查、X线检查[2]、CT 扫描[3]、生物力学检测[2]、组织学观察[3]等。本课题组已成功将PDO技术应用在犬腭裂模型上，并通过腭裂骨缘组织学观察得到骨膜成骨良好的结论[4]。本实验将进一步对其成骨过程进行荧光组织化学分析，以研究骨膜牵张成骨的连续过程及规律，为临床应用提供科学依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验设计 12～14月龄的健康杂种犬10只，雄性，体重10～15 kg。随机分组，空白对照组2只，饲养60 d后处死;实验组8只随机分为四组，每组2 只，牵张 20、30、40、60 d 后处死，牵张器放置侧为实验侧，未放置侧为自身对照侧。

    1.2牵张装置[4]本实验采用的镍钛记忆合金牵张器为自行设计并制作，主体分为两部分:施力部分与固位部分。该材料具有良好的超弹性及形状记忆效应，即在一定范围内，随着环境温度的变化，牵张器发生形变后可以产生恒定的牵张力。本实验所选用的骨膜牵张器在有效作用范围内的牵张力值为250±20g。

    1.3 手术方法 实验组在全麻下于腭中缝处切除长约2.0 cm、宽约0.6 cm的全层组织，形成人工硬腭裂。模型建立2月后，行第2次手术安置牵张器:首先将实验侧粘骨膜与骨面剥离分开，把未发生形变的牵张器放置于骨面并作充分贴合，钛合金固位钉固定后将切开处粘骨膜对位缝合，用热盐水纱布敷于牵张器处黏骨膜表面，使其温度升高发生形变，此时骨膜与腭骨骨面之间出现间隙，即刻产生骨膜牵张力。

    1.4 动物处理 根据实验动物分组，分别在牵张器成功放置20、30、40、60 d 后处死实验动物，在处死动物前倒数第14天和第3天对所有实验动物进行肌肉注射四环素，四环素用量按每公斤体重注射50 mg计算。切取腭裂家犬实验侧与自身对照侧裂隙缘骨组织以及空白对照组腭部骨组织，骨组织块经过石蜡包埋后，利用硬组织骨切片技术对骨组织进行沿骨膜垂直方位切片，以备四环素荧光染色观察新骨生成的动态过程。

    1.5 观察方法及测量 在Leica荧光显微镜(波长为360～400 nm)下观察腭部骨组织四环素荧光切片并拍摄照片 ......