陈相彪，杨伟明，陆 婧,王春林,唐 聃,贺新媛,骆礼波,石 磊

    (遵义医学院附属医院 甲状腺乳腺外科，贵州 遵义 563099)

    ·技术与方法·

    研磨法和组织分离器制备乳腺癌腋窝淋巴结单细胞悬液的比较

    陈相彪，杨伟明，陆 婧,王春林,唐 聃,贺新媛,骆礼波,石 磊

    (遵义医学院附属医院 甲状腺乳腺外科，贵州 遵义 563099)

    目的比较研磨法和Gentle MACS组织分离器制备乳腺癌患者腋窝淋巴结单细胞悬液在活细胞率、丝状物及细胞团块方面的优缺点，为淋巴组织细胞培养和流式分析找到一种更为可靠的方法。方法分别用研磨法和Gentle MACS组织分离器制备单细胞悬液，台盼兰染色后计数活细胞、死细胞、细胞团块和丝状物，并比较两种方法的优缺。结果两种方法制备的腋窝淋巴组织单细胞悬液在细胞存活率方面有显著性差异(P1 材料与方法

    1.1 主要实验材料 离心机、 OLMPUS显微、镜细胞滤网(70um筛孔) 、移液器(10μl)、24孔细胞培养板、离心管、载玻片、研磨器、Gentle MACS组织分离器及C管电子天平。

    1.2 主要实验试剂 RPMI1640培养基、台盼兰染液、双蒸水、PBS。

    1.3 实验方法

    1.3.1 制备台盼兰染液 4%台盼蓝母液的配制：取4g台盼蓝，加少量蒸馏水进行研磨，加双蒸水至100 mL，用滤纸过滤，4℃保存，使用时用PBS稀释至0.4% 。

    1.3.2 每份标本分为相同重量两份，随机分配到A组和B组。

    1.3.3 A组，标本剪碎至2～4mm大小碎片，置入gentle MACS C管中，按比例加RPMI1640培养基。Gentle MACS组织分离器上按操作说明制备单细胞悬液 ......