朱顺飞，廖珍媛，胡 燕，陈 超，李永菊，刘思静，罗军敏，熊思东，徐 林

    (1.遵义医学院免疫学教研室暨贵州省免疫学研究生教育创新基地，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 麻醉学系2011级学生，贵州 遵义 563099)

    ·基础医学研究·

    微小RNA-7过表达对人肺癌细胞体内外转移的影响

    朱顺飞1，廖珍媛1，胡 燕1，陈 超1，李永菊1，刘思静2，罗军敏1，熊思东1，徐 林1

    (1.遵义医学院免疫学教研室暨贵州省免疫学研究生教育创新基地，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 麻醉学系2011级学生，贵州 遵义 563099)

    目的探讨过表达miR-7对人肺癌细胞体内外转移的影响。方法将真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(命名为p-miR-7)体外瞬时转染人肺癌95D 细胞后，划痕法检测细胞的体外迁移情况；侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变；建立人肺癌裸鼠体内转移模型，HE染色观察过表达miR-7对肺部肿瘤转移的影响；免疫荧光技术检测肿瘤转移相关蛋白Sema4C蛋白的表达。结果过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体外迁移和侵袭能力(P1 材料与方法

    1.1 细胞株 人源性肺巨细胞癌95D细胞株，购于中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所。

    1.2 实验动物 24只4周龄雌性BALB/C裸鼠，购自第三军医大学实验动物中心。

    1.3 主要试剂和仪器 细胞培养液RPMI 1640(购自Hyclone公司)；PCR试剂和Premix Ex Taq(Takara)；优质胎牛血清(Solarbio)；L-谷氨酰胺(上海政翔化学试剂研究所)；双抗(氨卞青霉素钠、硫酸链霉素)(上海市第四制药股份有限公司)；LipofectamineTM2000转染试剂盒(invitrogen)；质粒pcDNA3.1(-)(invitrogen)；质粒小抽提取试剂盒(天根)； SW-CJ-2FD型超净工作台(苏州净化设备厂)；低温台式高速离心机和二氧化碳培养箱(Thermo)；TD5A-WS台式低速离心机(湘仪仪器)；IX-51倒置显微镜和IX-71倒置荧光显微镜(OLYMPUS)；激光共聚焦显微镜(Leica公司)。

    2 实验方法

    2.1 细胞培养及转染 人肺癌95D细胞用RPMI 1640培养液辅以10%胎牛血清、1 000 U/mL青霉素、100 μg/ mL链霉素,在37 ℃、5% CO2条件下培养。当细胞贴壁度达70%～80%时弃去培养液 ......