唐薇薇，郑 洪

    (1.遵义医学院 病理生理学教研室，贵州 遵义 563099；2. 遵义医学院附属医院 病理科，贵州 遵义 563099)

    RNA干扰survivin对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响

    唐薇薇1，郑 洪2

    (1.遵义医学院 病理生理学教研室，贵州 遵义 563099；2. 遵义医学院附属医院 病理科，贵州 遵义 563099)

    目的探讨RNA干扰survivin基因对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响。方法实验分3个组：siRNA组，采用脂质体法将靶向survivin siRNA荧光真核表达质粒载体pGPU6-GFP-survivin-shRNA转染卵巢癌HO-8910PM细胞；空白对照组，单纯细胞培养；阴性对照组，用表达与survivin序列无同源性的siRNA片段质粒pGPU6-GFP-NC转染细胞。于转染后48 h和72 h,用PI单染法流式细胞术检测各组HO-8910PM细胞周期的变化以及Western blot检测survivin 蛋白的表达情况。结果PI单染流式细胞仪检测细胞周期结果表明，与空白对照组和阴性对照组相比较，2个时间点siRNA组转染后的G0/G1期细胞比例明显增加，而G2/M期细胞比例均下降(P1 材料与方法

    1.1 细胞株与质粒 卵巢癌HO-8910PM细胞购自南京凯基生物公司。真核表达载体质粒pGPU6-GFP-survivin-shRNA为实验室自行设计构建[4]；PGPU6-GFP-NC质粒载体由上海吉玛制药技术有限公司馈赠。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 采用含10%新生牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的RPMI1640培养液，于37 ℃、5%CO2细胞培养箱内培养卵巢癌HO-8910PM细胞。

    1.2.2 细胞转染 实验分3组：空白对照组(Blank组)，用含10%新生牛血清的RPMI1640培养基常规培养细胞；阴性对照组(NC组)，采用表达与目的基因survivin序列无同源性的siRNA质粒pGPU6-GFP-NC转染细胞；siRNA组，用含survivin siRNA的pGPU6-GFP-survivin -shRNA质粒转染细胞 ......