郎长会，彭龙英，束晓梅

    (遵义医学院附属医院 儿科，贵州 遵义 563099)

    ·技术与方法·

    密度梯度法与羟乙基淀粉法培养脐血间充质干细胞比较

    郎长会，彭龙英，束晓梅

    (遵义医学院附属医院 儿科，贵州 遵义 563099)

    目的比较密度梯度离心法与羟乙基淀粉法体外分离培养脐血间充质细胞(hUCB-MSCs)的成功率，为今后细胞移植和基因治疗提供重要的细胞来源。方法取44份足月儿顺产或剖宫产脐带血，分为两组，每组22份，分别用密度梯度离心法结合贴壁法与羟乙基淀粉法分离脐血中单个核细胞，专用培养基培养，观察两种方法培养所得细胞的形态变化并绘制生长曲线，用流式细胞术鉴定细胞表面标志物CD14，CD29，CD44，CD45， CD105的表达。结果羟乙基淀粉法培养hUCB-MSCs的成功率(36.36%)高于密度梯度离心法结合贴壁法的培养成功率(9.1%)(P0.05)。结论羟乙基淀粉法可以提高hUCB-MSCs培养成功率，为hUCB-MSCs在临床中应用奠定基础。

    密度梯度离心；贴壁筛选法；羟乙基淀粉；脐血；间充质干细胞

    间充质干细胞(mesenchymal stem cells MSCs)起源于中胚层，具有多向分化潜能[1]。MSCs是组织工程、细胞移植中发挥有效作用的理想种子细胞。近年来，文献报道[2]多种组织(脐血、骨髓、牙齿、骨骼肌、肝、肺、羊水、胎盘及外周血等)可以分离出MSCs，尤其是脐血和骨髓。目前对于骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells BMMSCs)分离培养方法的研究较成熟，但由于其随着年龄增长分化能力及治疗作用逐渐下降，且采集量有限，使其应用受到限制[3-5]，而人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells hUCB-MSCs)具有来源丰富，取材方便，具有多向分化能力；免疫原性较弱等优势，被广泛应用于干细胞治疗及基因治疗中[6-8]。目前，从脐血分离MSCs的方法较多，各种方法的优缺点众说纷纭，且分离培养较为困难，寻找一种高效快速的分离方法迫在眉睫。有学者认为羟乙基淀粉法可缩短实验时间，可提高所得hUCB-MSCs纯度。本实验通过比较密度梯度离心法结合贴壁法与羟乙基淀粉法的培养成功率，试图选择一种高效体外分离方法从脐血中分离培养hUCB-MSCs，为以后在细胞移植和基因治疗中提供重要的细胞来源。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人淋巴细胞分离液(天津颢洋、LTS1077)、羟乙基淀粉550(hydroxyethyl starch HES天津颢洋 ......