韩云竹，宋 鸿

    (遵义医学院 微生物学教研室，贵州 遵义 563099)

    肝癌是我国常见肿瘤之一，由于进展较快、预后较差，每年有数十万人死于肝癌[1]。目前对肝癌的生物学性状及药物敏感性研究多采用单层细胞培养法，但单层培养存在较多局限性，可导致癌细胞生物学性状的缺失或改变[2]，有研究表明单层培养所揭示的细胞耐药机制也与体内耐药机制存在一定的差异性[3]。而三维培养通过构建细胞和材料的三维空间复合体，模拟细胞在体内形成的组织样结构、细胞间的相互联系、细胞与基质间的相互作用等特征[4]，在一定程度上弥补了单层培养的不足，对肝癌细胞的体外研究将更为理想。近年来，从天然褐藻中提取的藻酸盐由于不受温度控制、凝胶较易塑形、材料易得、价格便宜，且具有良好的生物相容性和生物可降解性[5]，在细胞三维培养中得到了广泛应用[6-7]。本研究采用藻酸盐为立体支

    架进行肝癌HepG2细胞的三维培养，通过观察细胞在该材料中的形态及生长情况，为其应用于肝癌组织工程研究及抗癌药物筛选提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器 HepG2细胞株为遵义医学院微生物学教研室保存；DMEM高糖型培养基(Gibco公司)；藻酸盐、钙黄绿素-碘化丙啶、四甲基偶氮唑盐、胰蛋白酶(Sigma公司)；DMSO、氯化钙(国产分析纯)；酶标仪(上海三科仪器有限公司，318-C型)；倒置显微镜及显微摄影系统(Olympus公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 藻酸盐溶液的制备 用0.01 mol/L的PBS(pH7.2)配制2%的藻酸盐溶液，常温下磁力搅拌器搅拌4～6 h，充分溶解后用0.22μm的滤器过滤除菌。4 ℃保存备用。

    1.2.2 细胞在凝胶中的培养 将HepG2细胞接种于培养瓶中，用含10%胎牛血清的DMEM培养液于5%CO2细胞培养箱中培养，待细胞汇合达80%后，用0.25%胰酶消化离心，细胞计数，调整细胞悬液浓度为1×106/mL；加入等量2%的藻酸盐溶液，充分混匀，将藻酸盐凝胶细胞混合悬液滴入自制模具中，以102 mmol/LCaCl2溶液处理 ......