程 龙，骆助林，向 珂，赵礼金

    (1.成都军区总医院 全军普通外科中心，四川 成都 610083；2. 遵义医学院附属医院 肝胆外科，贵州 遵义 563099)

    胆管树是一个不同管径的、相互交通的三维网络，从赫氏管向肝外肝胆管延伸。而被覆胆管的上皮细胞在发育上、结构上、功能上是一个不均一的细胞群体[1- 2]。胆管细胞对胆汁中胆盐重吸收的异质性在胆管细胞生理及病理过程中具有重要意义[3]。胆管细胞胆盐重吸收功能的异质性决定于胆盐转运蛋白表达的差异。然而，目前尚无胆盐转运蛋白在大、小胆管中表达差异的对比研究。本研究重点检测和分析顶侧钠依赖性胆汁酸转运体(Apical sodium-dependent bile acid transporter, ASBT)、回肠胆汁酸结合蛋白(Ileum bile acid binding protein, IBABP)和基底侧有机溶质转运体α(Organic solute transporter alpha OSTα)等胆汁酸转运蛋白在大鼠不同节段胆管中的表达差异，为研究胆管细胞胆盐重吸收异质性在胆管疾病发生中的作用奠定理论和实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 6～8周龄雄性Spragure-Dawley(SD)大鼠，二级动物，体重200～250g，购于第三军医大学大坪医院实验动物中心。大鼠饲养于恒温、清洁环境，维持12h昼夜节律，遵守实验动物使用及管理原则。

    1.2 大、小胆管的分离 参考我们前期研究中的肝内胆管分离方法[4]。SD大鼠麻醉后(戊巴比妥，50 mg/kg)，取上腹部横切口逐层进腹；22G留置针行门静脉穿刺置管，用D-Hank’s持续灌注5min后，换用含0.05%IV型胶原酶的D-Hank’s液继续灌注10 min；移出肝脏置于胆管细胞生长培养基中(含DMEM/F12=1∶1基础培养基中加入10%胎牛血清，100 U/L青-链双抗，400 μg/L地塞米松，10 g/L胰岛素，25 μg/L表皮生长因子)，钝性分离以去除肝实质及肝静脉，剩余肝内胆管树部分；在手术显微镜下将胆管树分为大胆管和小胆管两部分组织，即以第三级胆管分支末端为界，近端为小胆管组织，远端为大胆管组织(见图1A～B)，胆管组织存于液氮中用于蛋白及RNA提取。

    1.3 免疫组织化学检测胆管细胞胆盐转运蛋白的表达 通过免疫组织化学法检测大鼠肝胆管ASBT、IBABP及Ostα的表达。一抗分别为：ASBT, Santa cruz,1∶200；IBABP, Santa cruz, 1∶200； Ostα, Abcam, 1∶100 ......