周必英，刘美辰，杨凤娇

    (遵义医学院 寄生虫学教研室，贵州 遵义 563099)

    猪囊尾蚴病(Cysticercosis cellulosae)是由猪带绦虫(Taeniasolium)的幼虫囊尾蚴寄生于人或猪等而引起的人畜共患寄生虫病，已成为全球性的公共卫生问题，在我国的感染率为0.14%～3.20%。药物及手术治疗都有其局限性，研制疫苗是防治该病的重要手段[1-3]。研究表明，猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因具有良好的免疫原性和免疫保护性，是一种理想的疫苗候选抗原[4-7]。双歧杆菌(Bifidobacteria)是人和哺乳动物的肠道益生菌，也是一种基因工程受体菌。本研究拟在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSOL18的基础上[8],研究猪带绦虫TSOL18基因在长双歧杆菌中的表达情况，为猪囊尾蚴病的疫苗研制提供实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 质粒和菌种 质粒pGEX-TSOL18由本课题组构建保存；长双歧杆菌(B.longum)购自美国菌种典藏中心。

    1.2 主要试剂和仪器 质粒小量抽提试剂盒；T4DNA连接酶、DNA Marker、BamHI和EcoRI购自日本Takara公司；MRS培养基购自美国Difico公司；重组质粒pGEX-TSOL18和兔抗血清由本室制备[8],囊虫病猪血清采集自建的囊虫病猪感染模型，囊虫病患者血清由四川省疾病预防控制中心提供；其余试剂均为国产分析纯。核酸电泳装置购自北京六一仪器厂；PCR 仪购自美国 MJ-Research公司；厌氧发生器购自法国梅里埃公司。

    1.3 重组质粒pGEX-TSOL18电转化B.longum将B.longum冻干粉用无菌水充分溶解后，涂布于MRS琼脂平板上，37 ℃厌氧培养24～72 h，使其充分活化；挑取活化的单菌落，接种于4 mLMRS液体培养基中，37 ℃厌氧培养至菌体OD600 nm值为0.5左右；按1∶25比例接种于MRS培养基中，37 ℃厌氧培养24～72 h；冰浴30 min，4 ℃10 000 r/min离心1 min，弃上清，沉淀用预冷的0.5 M蔗糖清洗2次，再用100 μL 0.5 M蔗糖缓冲液重悬。取100 μL与重组质粒pGEX-TSOL181 μg混匀 ......