张子萍，葛正龙

    (遵义医学院 生物化学与分子生物学教研室，贵州 遵义 563099)

    白内障是目前世界上主要的致盲性眼病。在老年人中的发病率较高,其主要表现为晶状体的混浊。到目前为止，还无延缓白内障发生的有效方法，只有成熟时采取手术治疗[1]。探索有效的方法抑制白内障发生非常有必要。

    αA-晶体蛋白是晶体上皮细胞的特异表达蛋白，有分子伴侣活性，可与蛋白质结合，保护它们免受进一步的变性和降解，并能使聚集的蛋白质解聚,从而保证晶状体正常的透光度。晶状体中α-晶体蛋白量随着年龄增长会逐渐减少，使相应的分子伴侣功能下降，导致白内障形成。热休克蛋白(heat shock proteins，HSP)是目前公认的蛋白保护因子，有分子伴侣功能。热休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP70)是其重要成员之一，对保护晶状体的透明性有着重要的作用[2]。因此，本实验研究αA晶体蛋白组织特异性启动子(αACP)驱动的HSP70基因对大鼠半乳糖性白内障形成的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要药品及试剂 pIRES2-EGFP、pIRES2-EGFP-HSP70、pαACP-HSP70 (本室已构建)；多价阳离子脂质体(LipofectamineTM2000，美国Invotrogen公司)；D-半乳糖(张家港市思普生化有限公司)配成50%注射液,常规灭菌后使用；复方托吡卡胺滴眼液(参天制药株式会社),供镜检前扩瞳用。

    1.2 主要仪器 裂隙灯显微镜(苏州医疗器械厂)，荧光显微镜(德国Leica公司)等。

    1.3 实验动物 3周龄SD大鼠160只，平均体重(50±5) g，健康，无眼疾，雌雄不拘(第三军医大学实验动物中心提供)。

    1.4 方法

    1.4.1 分组及给药方法[3]将160只SD大鼠随机分成5组，每组32只。分别为：①NS组(阴性对照)；②半乳糖+ Lipo-pαACP-HSP70组(简写为半乳糖+α-70组)；③半乳糖+Lipo-pIRES2-EGFP-HSP70组(简写为半乳糖+ HSP70组)；④半乳糖+ Lipo-pIRES2-EGFP组(简写为半乳糖+EGFP组)；⑤半乳糖+NS组(阳性对照)。第1步：②③④⑤组颈背部皮下注射质量分数为50%的D-半乳糖(30mL·kg-1·d-1)，连续30d。第2步：注射半乳糖4h后，分别为①②③④⑤组单侧眼球球后注射0.9%NS、Lipo-pαACP-HSP70混合液、Lipo-pIRES2-EGFP-HSP70混合液、Lipo-pIRES2-EGFP混合液、0.9%NS 0.1 m L/只 ......