原凌燕,陈 彻,刘 玉,楚慧媛

    (甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000)

    大黄素(Emodin)是从大黄属、鼠李属、蓼属植物和番泻叶等中分离出来的主要成分，其化学名为1，3，8-三羟基-6甲基蒽醌，具有抗菌消炎、抗肿瘤、免疫抑制、保肝、促进胃肠平滑肌运动等作用[1-2]，由于许多肿瘤细胞对化疗药已不敏感而对大黄素还存在一定的敏感度，这就为抗肿瘤治疗提供了新的前景 。但体外研究也显示较大剂量的大黄素能导致近曲小管的损伤，具有潜在的肾脏毒性。筛选适当抗肿瘤药物与大黄素联合是肿瘤治疗的策略之一。

    3′-叠氮-3′-脱氧胸腺核苷(Azidothymidine，AZT)是一种端粒酶抑制剂，为胸苷类似物，是重要的艾滋病治疗药物。近年来，由于具有对端粒酶的竞争性抑制作用，AZT针对肿瘤的研究也引起了研究人员的广泛关注。实验证据显示AZT对多种肿瘤具有良好的抑制作用[3-5]，但由于治疗时所需剂量较大，由此产生的毒副作用也严重限制了AZT在临床抗肿瘤领域的进一步应用。近期的研究发现，AZT是较为突出的抗肿瘤协同剂，在安全剂量范围与其它药物联合应用时对实体肿瘤具有明显的协同治疗作用[6]。

    通过联合用药达到增效减毒目的是肿瘤研究中极富研究价值的课题。大黄素和AZT联合用药是否在人肝癌细胞HepG2细胞的增殖抑制和诱导凋亡方面存在协同作用，目前尚无相关报道。本研究旨在观察大黄素联合AZT对HepG2细胞的增殖抑制作用和对细胞凋亡的影响，为进一步探讨大黄素和AZT的临床抗肿瘤应用提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞 人肝癌细胞株HepG2，由甘肃中医学院分子生物学实验室保存。

    1.2 主要试剂和药品 大黄素(纯度大于98%)购于甘肃鹏程生物科技发展有限公司， AZT、MTT、DMSO均购自美国Sigma公司， DMEM购自美国GibcoBRL公司，胎牛血清购于美国Hyclone公司， Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 MTT比色法观察对细胞生长的影响 大黄素用DMSO溶解(DMSO终浓度1表示拮抗，CI=1表示相加。

    1.3.3 Annexin V /PI双染法检测细胞凋亡 取指数生长期的HepG2，制成单细胞悬液，调整细胞密度为5×104/mL，在6孔板中，每孔加2.0 mL细胞悬液。5% CO2培养箱中培养12 h细胞贴壁后，药物试验组每孔分别加入大黄素：终浓度为4 μmol/L；AZT：终浓度10 μmol/L；大黄素+AZT：终浓度4 μmol/L大黄素+10 μmol/L AZT ......