罗灿兰，田 虹，秦 伟，陈远寿

    (遵义医学院 生理学教研室，贵州 遵义 563099)

    血管性痴呆(vascular dementia,VD)是一种由出血、缺血、缺氧性脑血管病引起的以痴呆为主要表现的慢性渐进性智能障碍综合征[1]。它严重影响人们的生活质量，可VD造成的学习记忆功能障碍的具体机制还不十分明确，临床上的治疗方法目前效果欠佳。文献发现，cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的激活及变化与树突棘的可塑性和学习记忆功能有关，而磷酸化CREB(pCREB)是CREB的活化形式，位其下游的大量基因如即刻早基因、脑源性神经营养因子等基因的转录均受其调节，也参与了神经元生存过程，以及学习记忆等重要作用[2-3]。绞股蓝能否通过改变pCREB的表达量来影响小鼠的学习记忆功能还未知。近来有研究报道，绞股蓝总苷(Gprostemma Pentaphyllum Makino,GP)在缺血性脑损伤中能清除自由基、抗脂质过氧化，抑制钙超载、减轻线粒体损伤，建立脑动脉侧支循环、增加脑血流量，增强神经活性作用[4-5]，对血管性痴呆的空间记忆和长时程增强有改善作用[6]，显示绞股蓝总苷可能有神经保护作用。我们先前的研究也证实绞股蓝总苷可明显改善VD小鼠的学习记忆能力[7-8]。然而绞股蓝改善血管性痴呆所致的学习记忆功能障碍的具体机制目前尚不清楚。为此，本研究拷贝小鼠血管性痴呆模型，观察血管性痴呆小鼠以及绞股蓝治疗的VD小鼠海马神经元损伤和海马组织pCREB mRNA表达变化情况，以探讨绞股蓝改善血管性痴呆小鼠学习记忆功能及其可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验试剂与仪器 绞股蓝总皂苷(含量>90%)，购于东宇药业有限公司；水合氯醛粉剂，中国医药集团上海化学试剂公司提供；RNA抽提试剂、逆转录试剂盒、PCR用混合荧光引物，均由大连宝生物工程有限公司提供；苏木精，成都贝斯特试剂有限公司提供。CM1800冰冻切片机，德国徕卡公司生产；荧光显微镜，日本Olympus生产；Icycler荧光定量PCR仪，美国BIO-RAD公司生产；Tu-1810紫外分光光度计，北京通用分析仪器公司生产；Centrifuge5415D离心机，德国Eppendof公司生产；BeckMAN coulTER离心机，美国贝克曼公司生产。

    1.2 实验动物与分组 C57BL/6G 清洁健康雄性小鼠90只，体重22～25g，5周龄，采购于重庆第三军医大野战外科研究所医学实验动物中心，许可证号：SCXK-(军)2002008。适应性喂养5 d后随机将雄性C57BL小鼠80只分为5组：假手术组(Sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)、血管性痴呆+绞股蓝处理组(GP低、中、高剂量组) ......