田 昕，李 宁，李 冉

    (遵义医学院附属肿瘤医院 胸部肿瘤科，贵州 遵义 563099)

    肺癌是全球最常见的恶性肿瘤，目前缺乏简单有效的早期检查方法，因此，约2/3的患者确诊时已经出现远处转移，无手术机会，化疗是其主要的治疗手段，化疗耐药是亟待解决的问题。肿瘤耐药是多因素参与的过程，其生物化学机制有很多，DNA修复机制是目前研究较多的机制之一，核酸切除修复(nucleotide excision repair,NSE)为DNA修复的限速步骤，ERCC1为NES中DNA损伤识别和链间切割的关键基因，ERCC1表达上调可致肿瘤细胞DNA修复加快，导致耐药[1]。细胞因子活化的杀伤细胞被认为是新一代肿瘤过继治疗的首选方案之一。近年来，有学者发现CIK能逆转肿瘤耐药，其逆转耐药的机制涉及了多种蛋白质及通路的改变， ERCC1作为介导耐药的重要基因，是否也能被CIK所改变从而实现耐药的逆转，是我们需要思考的问题。因此，本研究通过在体外用CIK作用于A549/DDP细胞，检测其ERCC1 mRNA及蛋白的表达情况，与未予CIK干预组进行比较，明确CIK对A549/DDP细胞耐药的逆转作用，并探讨这种逆转作用是否与ERCC1有关。

    1 材料与方法

    1.1 主要实验材料

    1.1.1 实验细胞 A549细胞和 A549/DDP细胞购自中国医学科学院肿瘤细胞库。

    1.1.2 主要试剂及仪器 iMarkTMMicroplate Reader、

    MINI电泳系统、Chemi DosXRS电泳凝胶成像分析系统，BIO-RAD公司；ND-2000核酸蛋白测定仪，Thermo公司；注射用顺铂(冻干型)，齐鲁制药有限公司；MTT，solarbio公司；抗人CD3单克隆抗体、IFN-γ、IL-2，sigma-aldrich 公司；IL-1α，prospec公司；人淋巴细胞分离液，天津灏洋生物制品科技有限责任公司；RNAiso Plus、Real-Time RT-PCR反转录试剂盒，Takara公司；ERCC1 Rabbit Antibody，Cell Signaling Technology公司；Rabbit Anti-beta Actin Monoclonal Antibody，Beyotime公司；山羊抗兔IgG/辣根酶标记，中杉金桥生物技术有限公司，BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒，Beyotime公司。PCR引物，由TaKaRa公司合成(见表1)。

    表1基因引物序列 ......