唐一锋，马 帅，石 蓓

    (遵义医学院附属医院 心血管内科，贵州 遵义 563099)

    骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells ，MSCs)是治疗心血管疾病常用的种子细胞。除了具备干细胞共性外，还具备免疫耐受性，能被外源基因转染等特征。MSCs移植治疗能够促进梗死交界区域微血管生成，改善心肌梗死后的心功能[1]。高迁移率族蛋白1(High Mobility Group Box-1，HMGB1)是全身和局部炎症的一种关键的调节物，HMGB1可作用于人心脏成纤维细胞(cFbs)表面的RAGE受体促进生长因子如VEGF等表达增加[2]。实验拟在建立大鼠急性心肌梗死模型基础上，通过HMGB1表达，同时联合移植MSCs，观察梗死心肌局部促进血管生成因子表达变化，局部新生血管密度变化情况，证实增加外源性HMGB1是否能够进一步改善局部微环境，促进干细胞的存活及血管生成效应。以期为目前存在的移植归巢至梗死区干细胞数量少且快速凋亡等问题提供解决方案。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 体重为100～150g的SD大鼠细胞培养用；96只2～3月龄、体重为200～250g的SD雄性大鼠动物模型，分模型组、MSCs移植组、HMGB1注射组、HMGB1注射+MSCs移植组(n=24只)。由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供，经检疫符合国家实验动物标准，证书号：SCXK(渝)2012-0005。

    1.2 方法

    1.2.1 大鼠MSCs体外培养、鉴定 取100～150g 3周龄SD大鼠，无菌条件下分离双侧股骨和胫骨。用贴壁离心法[5]取得原代细胞。后进行细胞传代。实验用第3～4代细胞。利用流式细胞仪及APC anti-ratCD29、PE anti-ratCD45、PE anti-ratCD90抗体检测鉴定骨髓间充质干细胞表面标记物。

    1.2.2 细胞免疫荧光检测MSCs是否表达HMGB1的受体TLR4和RAGE。

    1.2.3 HMGB1干预MSCs后VEGF分泌水平的检测(酶联免疫吸附测定法，ELISA) 取培养第3代MSCs细胞接种于24孔板，加入含HMGB1的培养基，调节HMGB1的浓度分别为0、12.5、25、50、100、200、400、800ng/mL，以0ng/mL HMGB1为对照分别继续培养12、24和48h后，检测培养基上清液中VEGF的分泌水平。

    1.2.4 大鼠心肌梗死模型的建立10%水合氯醛按3mL/kg体重腹腔麻醉。小动物呼吸机辅助正压通气 ......