王 苗，李园园，邵美云，罗显涛，吴述铭，曾令荣，胡咏雄，岳昌武

    (1.遵义医学院 医学与生物学研究中心，贵州省特色微生物资源及药物开发重点实验室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 药学院，贵州 遵义 563099)

    白色念珠菌是最常见的条件致病性真菌，可以引起皮肤念珠菌病、黏膜念珠菌病、内脏及中枢神经念珠菌病以及龋齿等多种疾病。近年来，随着大剂量抗生素、激素、免疫抑制剂的广泛应用，以及器官移植术的开展，白色念珠菌引起的发病率渐趋增高，并可危及生命造成严重后果[1-4]，抗白色念珠菌药物副作用及白色念珠菌耐药问题也给白色念珠菌病的防治带来严峻的挑战[5-6]。本研究从赤水丹霞山土样中，共筛选得到7株具有抗白色念珠菌活性的放线菌，其中6株为链霉菌，1株为地中海拟无枝酸菌，可为开发放线菌来源的抗白色念珠菌的药物提供菌株来源。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 供试土样 土样采自赤水丹霞山区地表10 ～20 cm土层，共300份，无菌样品袋中常温保存、运输。

    1.1.2 培养基 分离培养基:ISP2固体培养基(葡萄糖4g，CaCO32g，麦芽抽提物10g，酵母抽提物4g，琼脂粉15g，加去离子水定容到1L)；自来水酵母粉琼脂培养基(酵母浸汁0.25g，K2HPO40.5g，琼脂粉18g，加去离子水定容到1L)；高氏1号培养基(可溶性淀粉 20g，KNO31g，NaCl 0.5g，K2HPO40.5g，MgSO40.5g，Fe SO40.01g，琼脂20g，加去离子水定容到1L)。

    发酵培养基：无钙GYM固体培养基(葡萄糖4g，酵母抽提物4g，麦芽抽提物10g，琼脂粉15g，加去离子水定容到1L)；含钙GYM固体培养基(无钙GYM+CaCO32g)；液体GYM培养基(葡萄糖4g，酵母抽提物4g，麦芽抽提物10g，1 mL微量元素预混液，加去离子水定容至1L)。以上培养基121 ℃，30 min，灭菌后备用。

    1.1.3 测活菌 白色念珠菌菌株由本实验室保藏。

    1.1.4 主要试剂 常规生化试剂均为分析纯，购自成都科龙化工；抗菌药物购自sigma公司；培养基成份购自碧迪生物上海公司；酚/氯仿等DNA提取试剂购自北京索莱宝公司；分子生物学试剂及酶类购自大连宝生物公司。

    1000×微量元素预混液(ZnSO4·7H2O 2g，FeSO4·7H2O 2g，MnCl2·4H2O 2g，CuSO4·5H2O 2g，Na2B4O7·10H2O 2g，(NH4)6Mo7O24·4H2O 2g 加去离子水800mL ......