卢彦欣，岳续朋，蔡树春，张巨峰

    (1.遵义医学院 珠海校区，广东 珠海 519041；2.广东药学院 生命科学与生物制药学院，广东 广州 510006)

    膀胱癌为男性第4大肿瘤疾病，是我国泌尿生殖系统高发肿瘤之一，并且发病率呈逐年升高趋势[1-4]。对膀胱癌发病机制以及疾病发生过程中体内各蛋白表达变化的研究有助于临床膀胱癌诊断，治疗和新药的研发[5]。瞬时受体电位香草酸亚型(transient receptor potential vanilloid,TRPV)为非选择性阳离子通道，主要通透钙离子[6-7]。钙离子作为第二信使，参与人体内多种生理、病理活动，包括神经递质合成与释放，细胞信号转导以及肿瘤发生等[8-9]。TRPV3是TRPV成员之一，主要在感觉神经细胞和皮肤角化细胞中表达，同时在脑、肝、膀胱等组织器官中也有表达[10]。目前关于TRPV3的研究主要集中在中枢神经系统和皮肤中，关于TRPV3在肿瘤中的研究尚少，我们通过检测膀胱癌细胞中TRPV3 mRNA 表达水平和生物学功能，探讨TRPV3在膀胱癌发生发展中的作用，以及TRPV3作为临床膀胱癌诊疗以及新药研发的潜质。

    1 材料与方法

    1.1 细胞、试剂和主要仪器 膀胱癌细胞系RT4，UM-UC-3，SW780，J82，TCC-SUP，T24和人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1细胞系系本实验室保存细胞株，源于ATCC，培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640或DMEM培养液中，在37 ℃、5%CO2细胞培养箱中培养。逆转录试剂盒及荧光定量PCR试剂盒均购自Takara公司，WST-1试剂盒购自武汉博士德生物公司，麝香草酚(Thymol)购自Sigma。

    本课题用到的主要实验仪器有CO2细胞培养箱(美国热电3111型)，倒置相差显微镜(日本Olympus CKX41型)，荧光定量PCR仪(Bio-RAD Chromo4)，酶标仪(Bio—RAD Model 680型)。

    1.2 实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time RT-PCR)检测TRPV3 mRNA 的表达 膀胱癌细胞接种于30 mm培养皿，长至约95%满后，1×PBS(pH=7.4)清洗3遍，加入1 mL TRIzol (Invitrogen)试剂，室温放置5 min，吸取细胞裂解液，加入200 μL氯仿，混匀，12 000 rpm在4 ℃离心10 min；离心后吸取上层液体 ......