李长福，梁大敏，束 波，杨加伟，生 欣，范 芳

    (遵义医学院 生物化学教研室，贵州 遵义 563099)

    在细胞的生存过程中DNA会遭受各种内外源性因素的损伤，使DNA发生单链或双链断裂(double-stranded breaks, DSBs)，如果这些损伤得不到及时修复，可引起细胞基因组不稳定性增加，最终导致细胞死亡，这也是抗癌药物致肿瘤细胞死亡的主要机制[1-2]。非同源重组修复(nonhomologous end-joining，NHEJ)是哺乳动物细胞中最重要的一种修复机制， DNA依赖性蛋白激酶催化亚基(DNA-dependent kinase catalytic subunit，DNA-PKcs)是NHEJ的核心组分，在DSBs修复及癌症预防方面发挥重要作用[3-4]。

    为进一步研究DNA-PKcs在NHEJ修复通路及肿瘤细胞DNA损伤修复中的作用，本研究将靶向DNA-PKcs的干扰质粒shDNA-PKcs转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU，观察DNA-PKcs基因沉默对其下游分子Artemis的激活作用，探讨DNA-PKcs基因影响肝癌细胞Bel7402/5-FU 耐药性的可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 PRNAi-U6.1-Neo shRNA质粒(百奥迈科生物科技有限公司)，BEL7402/5-FU细胞株(南京凯基公司)， LipofectamineTM2000 Reagent(Invitrogen公司)，DNA-PKcs抗体(Assay biotech公司)，Artemis抗体及P-Artemis抗体(abcam公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 用含10%FBS、20 μg/mL 5-FU的1640培养液培养BEL7402/5-FU细胞，置于37 ℃、5%CO2孵箱中培养 ......