徐德林，蔡振锋，张 林，储士润，祝 飞，钱 刚

    (1.遵义医学院 细胞生物学与遗传学教研室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 第一临床学院，贵州 遵义 563099)

    由于金钗石斛极高的经济和药用价值[1]，长期以来被人们过度采摘，再加上其自然生长缓慢、繁殖率低等生物因素影响，野生资源渐近枯竭，目前资源濒危[2]，已被列为国家二类保护植物并列入《国家重点保护野生植物名录》[3]。因此，如何保护种质资源，并降低人们对野生金钗石斛的依赖，实现金钗石斛资源的可持续发展和利用迫在眉睫。近年来，随着生物技术的进步和栽培技术的不断发展，金钗石斛的人工繁育已成一定规模[1,4]，高产优质种苗正成为科研工作者积极探索的热点。针对金钗石斛种子自然发芽率极低的状况，本研究明确了最适种子萌发的培养基；并利用植物组织培养技术寻求诱导金钗石斛愈伤组织培养基，为实现其快速无性繁殖提供保障和技术参数，也为细胞悬浮培养、细胞杂交、多倍体优质种苗培育等后续研究奠定了坚实的实验基础[5]。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 金钗石斛未开裂的蒴果。

    1.2 金钗石斛蒴果消毒 取尚未开裂的金钗石斛蒴果，流水下冲洗20 min，置超净工作台上用75%酒精浸泡30 s，并不断轻摇，用无菌水冲洗3次，然后在加入有两滴Tween-80的0.1%升汞中浸泡12 min，浸泡过程中不断轻摇，最后用无菌水冲洗5次，用吸水纸吸干表面的水分，备用。

    1.3 金钗石斛种子的播撒 在超净工作台上将消毒后的金钗石斛蒴果用无菌解剖刀纵向剖开，用无菌镊子轻轻镊取种子播撒在预先配置好的固体培养基内，每瓶培养基播撒量以均匀铺陈在培养基表面为宜。

    1.4 萌发率计算方法 每种培养基取5皿，统计并记录每皿中萌发的种子数和种子总数，取二者的比值作为萌发率。

    1.5 培养基配制与培养方式 以MS固体培养基为基本培养基，附加萘乙酸(Napthalene acetic acid，NAA)、6-苄基腺嘌呤(6-Benzyl adenine，6-BA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid，2,4-D)三种不同激素组合，使用的天然添加物为土豆，加入量为10g/L，各种培养基附加30g/L蔗糖和7g/L琼脂，pH5.95(高压灭菌前)。采用光照和黑暗两种培养方式进行金钗石斛种子的萌发诱导和愈伤组织的诱导(见表1)。培养基接种外植体后在温度为25±2℃、光照周期12h/d、光照强度2000—2500lx条件下进行种子的萌发与愈伤组织诱导培养的研究 ......