秦 瑶，赵鸿彦，张文航，王冬梅

    (遵义医学院附属医院 心内科，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    使用FVB/N和C57BL/6品系小鼠制备TFAM敲低转基因小鼠的比较

    秦 瑶，赵鸿彦，张文航，王冬梅

    (遵义医学院附属医院 心内科，贵州 遵义 563099)

    目的 比较TFAM敲低对不同品系小鼠的影响。方法 通过慢病毒显微注射的方法分别制备FVB/N和C57BL/6品系的TFAM敲低转基因小鼠；统计比较两种品系小鼠的制备和繁殖情况；使用定量PCR方法检测比较两种品系小鼠中TFAM的敲低情况。结果 使用PCR方法可鉴定转基因阳性小鼠，此小鼠耳朵皮肤组织可观察到绿色荧光；两种品系转基因小鼠具有相似的TFAM敲低水平；TFAM敲低能够子代遗传；C57BL/6敲低小鼠的繁殖能力显著弱于FVB/N小鼠。结论 成功制备了FVB/N和C57BL/6品系的TFAM敲低转基因小鼠，TFAM敲低对于两种品系的小鼠具有明显不同的影响。

    线粒体；线粒体转录因子A；转基因小鼠

    线粒体是细胞内主要的能量代谢细胞器，对于维持细胞的正常功能具有重要的作用。近年来发现大量的疾病都与线粒体功能的紊乱有关[1-3]。心脏是一个高能量代谢的器官，线粒体功能的缺陷，对心脏的影响尤其严重，心衰，心律失常，心力衰竭等临床表现均与线粒体异常有关[4-5]。深入了解线粒体功能对线粒体相关疾病的研究具有重要的意义。

    线粒体转录因子A(TFAM)是一个重要的线粒体相关蛋白，对于维持线粒体正常功能有着重要作用。通过组织特异性敲除TFAM能够得到线粒体DNA(mtDNA)异常，以及线粒体功能缺陷的小鼠[6]。通过RNA干扰技术能够获得多组织TFAM下调的转基因小鼠，这种小鼠的心脏细胞线粒体功能受损[7]。这些基因敲除及敲低的小鼠为在整体水平上研究线粒体相关疾病提供了很好的模型。

    由于不同的疾病有着不同的最适合的小鼠品系模型，因此本研究中我们使用两种不同的小鼠品系制备了TFAM敲低的转基因动物，发现同样的条件下，TFAM的敲低对于不同品系的小鼠的生存繁殖会产生显著不同的影响，本研究为在不同品系小鼠中研究基因功能提供了重要的参考意义。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株 293FT细胞购于life technology公司。

    1.2 实验动物 FVB/N和C57BL/6小鼠购于第三军医大学实验动物中心。

    1.3 实验方法

    1.3.1 细胞培养 293FT细胞使用DMEM培养基 ......