于伟娜，冯继红，丁陈波，高绍莹，徐 林，袁建波，罗军敏

    (1.遵义医学院免疫学教研室暨贵州省免疫学研究生教育创新基地，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院附院附属肿瘤医院，贵州 遵义 563099；3.遵义医学院 医学检验系2011级学生，贵州 遵义 563099)

    临床医学研究

    PRDX2基因沉默促进结直肠癌细胞上皮-间质转化增强侵袭转移能力

    于伟娜1，冯继红2，丁陈波1，高绍莹1，徐 林1，袁建波3，罗军敏1

    (1.遵义医学院免疫学教研室暨贵州省免疫学研究生教育创新基地，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院附院附属肿瘤医院，贵州 遵义 563099；3.遵义医学院 医学检验系2011级学生，贵州 遵义 563099)

    目的 探讨Peroxiredoxin 2(PRDX2)基因沉默在结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)中的作用及其参与侵袭转移的可能机制。方法 将带有抗性的对照shRNA(shRNA-Control)和PRDX2 shRNA(shRNA-PRDX2)慢病毒颗粒分别转染结直肠癌SW480细胞，转染后细胞分为PRDX2沉默组(shRNA-PRDX2)和空载对照组(shRNA-Control)。采用免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测两组细胞中PRDX2蛋白和mRNA表达；以5 ng/mL的TGF-β1作用两组细胞，在0、48、72 h观察两组细胞形态学变化；划痕实验和Transwell小室分别检测两组细胞体外迁移和侵袭能力；Western blot和qRT-PCR法检测E-cadherin、Vimentin、Snail、Twist1和MMP-9蛋白及mRNA表达。结果 与对照组相比，PRDX2 沉默组细胞PRDX2蛋白和mRNA的表达显著降低(P1 材料与方法

    1.1 材料 人结直肠癌Dukes B期细胞株SW480购自中科院上海细胞库；PRDX2shRNA慢病毒载体及对照载体Control shRNA购自上海吉凯基因化学技术有限公司；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自杭州四季青公司；Leibovitz’s L-15(L-15)培养基购自Gibco公司；0.25%胰酶(含EDTA)购于Solarbio公司；单克隆兔抗人E-cadherin、Vimentin购自Abcam公司；兔抗人Twist1、Snail和MMP-9抗体购自Santa Cruz公司；嘌呤霉素(puromycin)购自Sigma公司；全蛋白提取试剂盒购自凯基生物科技有限公司；ECL试剂盒、鼠抗人β-actin、辣根过氧化物酶( HRP) 标志的羊抗兔IgG二抗、DAPI染色液、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒购自Beyotime公司；TGF-β1购自Peprotech公司；FastQuant cDNA第一链合成试剂盒购自天根生化科技有限公司；Trizol、SYBR?Premix Ex TaqTMII购自TaKaRa公司；PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成 ......