柯棠山，董 进，廖 娟，刘坤祥

    (遵义医学院 医学与生物学研究中心，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    兔骨骼肌卫星细胞的分离、培养及成肌特性

    柯棠山，董 进，廖 娟，刘坤祥

    (遵义医学院 医学与生物学研究中心，贵州 遵义 563099)

    目的 建立高纯度、高丰度的兔骨骼肌卫星细胞的分离、培养方法，并对培养的肌卫星细胞体外增殖和成肌特性进行观察。方法 采用改良I型胶原酶和胰蛋白酶混合消化法结合差速贴壁培养以分离、纯化1周龄幼兔小腿三头肌来源的骨骼肌卫星细胞。镜下观察肌卫星细胞生长形态，结蛋白(Desmin)免疫组化染色鉴定体外培养的肌卫星细胞，MTT法绘制细胞生长曲线，并对分离培养的肌卫星细胞成肌特性进行诱导培养观察。结果 差速贴壁后的悬浮肌卫星细胞折光性强，呈透亮球形，数量较多，贴壁生长后逐渐变为长梭形；免疫组化染色检测分离培养的细胞高表达Desmin，证明为肌卫星细胞，纯度高达95%；传代培养的肌卫星细胞24 h后开始增殖，第3～7天处于对数生长期，第8天后进入平台期；不经诱导分化培养基培养的肌卫星细胞也可融合形成肌管，但形成肌管速度不及诱导分化培养组快速。结论 成功建立了具有操作简便、不易污染和纯度高的兔骨骼肌卫星细胞分离、培养方法,为采用肌卫星细胞为种子细胞的再生医学研究奠定实验基础。

    肌卫星细胞；细胞培养；兔

    骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells，SC)是一种位于肌纤维肌膜与基底膜之间的多潜能干细胞，由Mauro首次发现。肌卫星细胞通常处于有丝分裂静止期，当骨骼肌受到外伤和负重锻炼等应激刺激时，肌卫星细胞即被激活而迅速增殖，补充死亡的肌纤维、修复损伤的骨骼肌。骨骼肌卫星细胞池内干细胞数量和质量的稳定，对维持体内肌纤维的数量与生长及损伤后骨骼肌的修复和再生具有重要意义[1]。高纯度的肌卫星细胞分离、培养方法，是研究肌卫星细胞生物学特性的重要工具[2]。目前虽有一些文献报道体外肌卫星细胞培养的方法，但对兔卫星细胞的研究较少，且操作步骤粗略,可重复性低。本实验拟建立可获取高纯度、较多数量兔骨骼肌卫星细胞的分离及培养方法，为后续的肌卫星细胞移植治疗失神经肌萎缩研究奠定了基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 选用1周龄健康新西兰大白兔，雌雄不限，由遵义医学院实验动物中心提供。

    1.2 主要试剂 HG-DMEM培养基、DMEM/F12培养基由Hyclone公司提供，Ⅰ型胶原酶购于Sigma公司 ......