基础医学研究

    防龋基因疫苗pVAX1-SPG在BALB/c小鼠免疫部位的原位表达

    孙天瞳1，刘建国1,2，姜晶1，王伟1，亓鹏1，白国辉1,2

    (1.遵义医学院口腔学院，贵州 遵义563099；2.贵州省高等学校口腔疾病研究特色重点实验室暨遵义市口腔疾病研究重点实验室，贵州 遵义563099)

    [摘要]目的 观察防龋基因疫苗 pVAX1-SPG免疫BALB/c小鼠后的原位表达。方法 重组质粒pVAX1-SPG经颌下腺区皮下注射、股四头肌注射和鼻腔黏膜滴注免疫BALB/c小鼠,免疫组化技术观察目的蛋白SpaP-P/GbpA-GBD在免疫部位的表达情况。结果 小鼠双侧颌下腺组织内均可见目的蛋白的弥漫性表达，尤以导管区域表达强烈，导管细胞的胞浆内呈强阳性染色；股四头肌肌纤维胞浆和肌膜下方阳性染色，呈不均匀的受限表达；鼻腔黏膜上皮下方的固有层与结缔组织中可见呈浅棕黄色染色的目的蛋白表达。结论 重组质粒pVAX1-SPG能够在BALB/c小鼠的免疫部位正确表达目的蛋白。

    [关键词]基因疫苗；变异链球菌；龋齿；表面蛋白；葡聚糖结合蛋白

    龋病是人类最常见的细菌感染性疾病，严重危害着人群的口腔健康。变异链球菌族细菌，主要是变异链球菌(Streptococcus mutans，S.mutans)和表兄链球菌(Streptococcus sobrinus)被认为是最重要的致龋菌。其在牙面的黏附、聚集和产酸，是龋病发生的先决条件[1-2]。S.mutans的毒力因子表面蛋白(surface protein antigen，SpaP)在介导S.mutans对牙面的蔗糖非依赖性黏附中起着关键作用，另一毒力因子葡聚糖结合蛋白(glucan binding proteins A ,GbpA)通过与细菌产生的细胞外多糖-葡聚糖结合介导细菌在牙面的黏附和聚集，参与了S.mutans在获得性膜上的蔗糖依赖性粘附。

    本课题组前期构建了编码S.mutansSpaP的P区(SpaP-P)和GbpsA功能区葡聚糖结合区(GBD)结构基因的重组真核表达质粒pVAX1-SPG，本研究进一步将该重组质粒经颌下腺区皮下注射、股四头肌注射和鼻腔黏膜滴注免疫BALB/c小鼠，观察重组蛋白SpaP-P/GbpA-GBD在动物免疫部位的表达，为后续观察该基因疫苗的免疫效果和寻找理想的免疫途径的动物实验研究提供依据。

    1材料与方法

    1.1主要试剂重组质粒pVAX1-SPG (本课题组前期构建)；真核载体质粒pVAX1(美国Invitogen公司产品) ......