周建国，张 钰，吕水萍，王 菲，王 怡，柏玉举，苟晓丽，张廷友，沈 刚，马 虎

    (遵义医学院附属医院肿瘤医院暨贵州省生物治疗人才基地，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    Rab25基因3′ UTR荧光素酶报告基因载体及突变体的构建

    周建国，张钰，吕水萍，王菲，王怡，柏玉举，苟晓丽，张廷友，沈刚，马虎

    (遵义医学院附属医院肿瘤医院暨贵州省生物治疗人才基地，贵州 遵义563099)

    [摘要]目的 针对Rab25基因3′端非翻译区(untranslated region，3′UTR)构建Rab25荧光素酶报告基因载体及突变体，为研究miR-125a-5p在肺癌耐药中调控其靶基因RAB25提供有效的工具。方法 PCR扩增包含Rab25的3′UTR的DNA片段，克隆至荧光素酶载体GV306，构建GV306/Rab25′ UTR载体；通过TrgetScan Release 6.2查找Rab25与miR-125a-5p结合区域并设计突变序列，参照构建GV306/Rab25′ UTR载体方法构建GV306/Rab25′ UTR突变载体。结果 通过获得Rab25与miR-125a-5p的种子区域及侧翼部分120~126 nt，并上下延伸150 bp，合成Rab25′ UTR，并且在120~126 nt区域设计突变序列，构建了GV306/Rab25 3′ UTR及其突变载体。结论 成功构建了含Rab25基因3′UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体，为进一步研究Rab25在非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药中的作用打下基础。

    [关键词]Rab25；miR-125a-5p；荧光素酶报告基因质粒；非小细胞肺癌；基因调节

    miRNAs与多种肿瘤的发生发展有密切关系，其主要通过靶向mRNA的3′非翻译区(3′UTR)降解或抑制mRNA蛋白质翻译，从而影响肿瘤增殖、侵袭及耐药等生物学行为[1-3]。miR-125a-3p和miR-125a-5p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)组织中的表达显著低于周围正常组织[4]。本课题组在前期工作中发现经紫杉醇诱导悬浮培养的A549 CD133+/CD326+亚群细胞中miR-125a-5p的表达异于普通A549细胞[5]。Rab25在乳腺癌、卵巢癌等多种肿瘤组织中表达上调，并可促进肿瘤细胞的侵袭和转移[6-7]，也有研究显示Rab25是表皮生长因子受体小分子酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors, EGFR-TKIs)耐药产生的重要分子之一 ......