杨加伟，龙朝康，张海桥，葛正龙

    (遵义医学院 生物化学教研室，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    块茎特异性启动子驱动的hIL-12在转基因马铃薯中的表达

    杨加伟，龙朝康，张海桥，葛正龙

    (遵义医学院 生物化学教研室，贵州 遵义563099)

    [摘要]目的 检测人白细胞介素-12(hIL-12)蛋白在转基因马铃薯块茎中的表达量、遗传稳定性以及组织特异性。方法 提取转基因马铃薯块茎与叶片总蛋白，利用hIL-12抗体进行western blot和ELISA检测。结果 在5株转基因马铃薯的块茎中检测到了hIL-12蛋白的表达，表达量最高达到3.04 μg/g(总蛋白)。此外，同一植株的多个块茎中hIL-12的表达具有一致性，而在叶片中未检测到明显的表达。选取2株马铃薯植株的块茎进行种植，其后代也能检测到稳定的hIL-12蛋白表达。结论 本研究获得了稳定高表达hIL-12蛋白的转基因马铃薯植株，为利用马铃薯生物反应器高效表达生产hIL-12蛋白提供了理论依据。

    [关键词]人白细胞介素-12；蛋白表达；植物生物反应器；Ppatatin启动子

    人白细胞介素-12(hIL-12)是一种大小约为75 kD，由单核细胞-巨噬细胞分泌的糖蛋白细胞因子，由1个约35 kD的小亚基和1个约40 kD的大亚基通过二硫键连接[1]。它的生物学功能包括增强细胞毒性反应；诱导INF-γ、IL-2及肿瘤坏死因子TNF-α的生成；以及抗血管生成和抗肿瘤效应等[1-2]。此外，IL-12还被用作佐剂和某些抗原共同注射以增强机体对胞内病原体的免疫力[3]，在临床上将有着广阔的应用前景。植物生物反应器具有操作简便、产物活性高、成本低、易扩大规模等优点，利用植物生物反应器高效表达生产IL-12，降低IL-12的生产成本，具有重大的应用价值[4]。

    本实验室前期研究中，构建了马铃薯块茎特异性启动子Ppatatin驱动的hIL-12表达载体并导入马铃薯基因组，获得了阳性转基因植株[5-6]。因此，本研究接下来对阳性转基因马铃薯中hIL-12在蛋白水平的表达情况进行检测，为利用马铃薯高效表达生产hIL-12蛋白提供理论依据。

    1材料与方法

    1.1实验材料与主要试剂本研究用转基因马铃薯材料由本实验室前期研究获得[6]。主要试剂有人hIL-12抗体(Abcam公司)，HRP标记二抗(碧云天生物技术公司)、化学发光试剂盒(Bio-Rad公司)、SDS-PAGE凝胶试剂盒(碧云天生物技术公司)、hIL-12 ELISA试剂盒(生工生物工程上海股份有限公司)等 ......