骆诗露，黄 健，韩道宾，陈泽慧，朱杰华，闵 迅

    (1.遵义医学院 医学检验系，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院附属医院 医学检验科，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    肺炎链球菌SP2108蛋白的原核表达及免疫原性分析*

    骆诗露1，黄健2，韩道宾1，陈泽慧2，朱杰华2，闵迅2

    (1.遵义医学院 医学检验系，贵州 遵义563099；2.遵义医学院附属医院 医学检验科，贵州 遵义563099)

    目的 制备纯化的肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,S.pn)SP2108蛋白，分析其在常见S.pn菌株中的保守性，并评价其作为S.pn候选疫苗的可行性。方法 利用PCR法扩增全长SP2108基因，将其克隆至原核表达载体pCold TF中，转化E.coliBL21(DE3)后IPTG诱导蛋白表达，经Ni-NTA树脂纯化获得高纯度的目的蛋白；将纯化蛋白免疫C57BL/6小鼠制备多克隆抗体，并用间接ELISA检测效价，Western blot鉴定该蛋白在6种常见S.pn菌株的保守性。从Genebank中找出不同S.pn菌株的SP2108蛋白质氨基酸序列，并用ClustalX 2.1软件分析其序列保守性。结果 获得了可溶性形式的SP2108蛋白，该重组蛋白免疫小鼠后可获得高滴度的多克隆抗体；Western blot验证了SP2108 蛋白在6株常见S.pn菌株中均有表达；SP2108蛋白在不同型别S.pn中氨基酸序列保守性为100%。结论 原核表达并纯化了SP2108蛋白，该蛋白保守性高，免疫小鼠后可获得高滴度的多克隆抗体，可能是一种较好的S.pn候选蛋白疫苗。

    肺炎链球菌；SP2108蛋白；原核表达；保守性；C57BL/6小鼠

    肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,S.pn)是定植于人体鼻咽部黏膜表面的革兰阳性条件致病菌，可引起肺炎、中耳炎、脑膜炎等疾病，其在65岁以上老年人及5岁以下儿童中具有较高的致病率和致死率[1]。据统计，肺炎居我国5岁以下儿童死因的前五位，在重症肺炎中，约有50%是由S.pn引起[2]。近年来，由于抗生素的滥用及S.pn多重耐药菌株的广泛出现，预防和控制S.pn感染已经进入到疫苗接种阶段[3]。目前上市的S.pn疫苗主要包括23价荚膜多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗，前者抗原性弱，主要适用于中老年人及存在高风险的成年人，对2岁以下的幼儿无免疫保护力[4]；后者虽能显著减低侵袭性S.pn疾病，但该种疫苗存在血清覆盖范围窄、生产成本高、非疫苗血清型替换等缺点 ......