徐先林，欧刚卫

    (遵义医学院 生物化学教研室，贵州 遵义 563099)

    临床医学研究

    儿童粪便中四环素抗性大肠杆菌的分离与鉴定*

    徐先林，欧刚卫

    (遵义医学院 生物化学教研室，贵州 遵义563099)

    目的 分离、鉴定无四环素使用史儿童粪便中四环素抗性菌株。方法 采用含150 μg/mL四环素营养琼脂培养基分区划线法从儿童粪便样本中分离、纯化四环素抗性细菌; 通过观察菌落外观形态特征、16S rRNA基因测序法、生理生化试验、梅里埃全自动微生物分析仪鉴定细菌。结果 从儿童粪便样本中随机分离出20例细菌, 鉴定结果显示均为大肠杆菌。结论 在未接触四环素儿童粪便中大肠杆菌是携带四环素抗性的细菌之一。

    儿童;四环素;16S rRNA基因;分离;鉴定

    肠道是一个巨大的微生物生态系统, 菌群种类复杂, 由1000到1150种细菌组成[1], 菌群结构稳定对人体健康至关重要。研究表明, 直接或间接使用抗生素都会破坏环境中菌群平衡并致抗性基因出现[2-3]。四环素不良反应和副作用较大, 已多年禁止使用于儿童疾病治疗[4], 但仍作为饲料添加剂以及促生长剂广泛应用于水产、家禽和家畜养殖[5]。四环素具有高度水溶性和低挥发性导致其可以稳定存在于环境[6], 通过食物链等方式进入人体肠道, 造成抗生素及抗性基因蓄积于人体肠道。前期实验研究结果表明, 受试儿童虽无明确四环素使用史, 然而大多数粪便样本检测出四环素抗性基因tet(B)[7]。抗性基因在肠道菌群间广泛传播可能导致菌群稳定结构破坏, 可导致潜在致病菌过分繁殖, 破坏肠粘膜屏障从而引发多种疾病。而对于儿童生长发育的潜在影响仍有待研究。

    分离肠道细菌并鉴定抗生素抗性菌株, 对于初步了解肠道内抗性菌株分布情况及探讨抗性基因的携带与传播方式有着重要意义。目前, 关于四环素抗性细菌探讨主要集中在环境土壤或者动物粪便样本, 但对于人体肠道菌群中四环素抗性细菌现状有待研究。我国儿童已经禁止使用四环素多年, 是探讨环境抗生素对儿童肠道菌群抗生素抗性菌及相关抗性基因的分布和携带状态、对肠道菌群的种类和分布以及对儿童健康的影响十分理想的群体。本实验采用四环素选择性培养基分纯并鉴定儿童粪便样本中四环素抗性大肠杆菌, 以探讨儿童肠道菌群中大肠杆菌四环素抗性基因携带状况, 为进一步研究环境抗生素对儿童健康影响提供实验基础。

    1 材料与方法

    1.1样本遵义市健康儿童粪便样本, 无四环素使用史。粪便采集后, 迅速置于-80 ℃保存,并尽快进行后续实验 ......