陶 冬，邓 妍，张 蓓，罗 英，范奇元

    (1.遵义医学院 公共卫生学院毒理学教研室，贵州 遵义 563099；2.贵州省毕节市第一人民医院 全科医学科，贵州 毕节 551700；3.贵州省遵义市第一人民医院 骨一科，贵州 遵义 563000；4.遵义医药高等专科学校 卫生管理系，贵州 遵义 563000)

    基础医学研究

    锰对大鼠纹状体神经细胞PARK2表达的影响

    陶 冬1，邓 妍2，张 蓓3，罗 英1，范奇元4

    (1.遵义医学院 公共卫生学院毒理学教研室，贵州 遵义 563099；2.贵州省毕节市第一人民医院 全科医学科，贵州 毕节 551700；3.贵州省遵义市第一人民医院 骨一科，贵州 遵义 563000；4.遵义医药高等专科学校 卫生管理系，贵州 遵义 563000)

    目的 研究锰在RNA干扰条件下对大鼠纹状体神经细胞PARK2基因的影响。方法 使用不同浓度(0、100、300和500 μmol/L)的锰处理感染PARK2 shRNA的原代大鼠纹状体神经元细胞24 h，采用实时荧光定量和蛋白印迹法检测PARK2基因mRNA水平和蛋白质表达的变化。结果 在单纯感染慢病毒的纹状体神经细胞处理组中，不同锰处理浓度组与对照组比较，300和500 μmol/L锰浓度处理24 h后，PARK2 mRNA及蛋白表达显著下降(P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 本实验所用动物为清洁级动物，购买自第三军医大学，成年雌雄SD大鼠[生产许可证号：SCXK(渝)2012-0005]繁殖的子代大鼠作为实验使用的神经细胞材料来源。

    1.1.2 药品与试剂 shRNA慢病毒载体构建由上海吉满公司完成，PCR检测相关试剂购于美国Fermentas公司，Western blot检测所使用的相关试剂采购于上海碧云天公司。

    1.1.3 主要仪器 CO2培养箱(美国Thermo Forma 370)，倒置显微镜(日本奥林巴斯，CKX41)，实时荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad，CFX96)。

    1.2 方法

    1.2.1 神经细胞的分离与培养 雌雄大鼠交配后，取1 d龄新生SD大鼠，无菌条件下取完整脑组织， 置于D-hanks平衡盐溶液中，分离出纹状体，将纹状体剪成直径为1 mm3左右小块。在0.125% g/L胰酶消化20 min，过滤，离心分离获得纹状体神经细胞。培养板中使用的细胞浓度为1×106个/mL，接种于预处理(包被)过的细胞培养板 ......