董 伟，李大玉，惠 景，范 芳，李长福，姜 念，刘 云，朱欣婷

    (1.遵义医学院 贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治重点实验室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 生物化学教研室，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    壳聚糖-磺酸甜菜碱对人肝癌HepG-2细胞的siRNA递送实验研究

    董 伟1,2，李大玉2，惠 景1,2，范 芳1,2，李长福1,2，姜 念1，刘 云1，朱欣婷1,2

    (1.遵义医学院 贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治重点实验室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 生物化学教研室，贵州 遵义 563099)

    目的 设计合成新型高分子材料壳聚糖-磺酸甜菜碱(CS-DMAAPS)化合物，并考察该材料与siRNA复凝后对人肝癌HepG-2细胞的转染能力。方法 采取Michael加成法将含C=C双键的磺酸甜菜碱化合物(DMAAPS)与壳聚糖(CS)偶联接枝；利用核磁共振氢谱进行结构表征；CCK-8检测材料的细胞相容性；荧光显微镜观察siRNA的转染效率；Real-time PCR检测转染siRNA后对Bcl-2 mRNA的沉默效率。结果 核磁共振氢谱数据表明：DMAAPS已成功枝接到CS上。荧光显微镜观察结果显示：质量比(m0/mt：CS-DMAAPS/siRNA)为32、16、8、4、2的复合颗粒分别转染人肝癌HepG-2细胞24 h后，转染率分别为33.78%、45.82%、50.98%、69.89%、81.22%。Real-time PCR检测结果显示：质量比为4的CS-DMAAPS/siRNA复合颗粒转染人肝癌HepG-2细胞48 h后，对人肝癌HepG-2细胞的Bcl-2基因沉默效率为26.8%。结论 壳聚糖-磺酸甜菜碱(CS-DMAAPS)化合物能实现siRNA对人肝癌HepG-2细胞的转染，且细胞相容性良好，能实现目标基因的部分沉默。

    壳聚糖；磺酸甜菜碱化合物；复合颗粒；人肝癌HepG-2细胞；siRNA

    上世纪60年代，著名分子生物学家Joshua Lederberg认为分子生物学最终的应用将是直接控制人类染色体上的某些核苷酸序列[1]。因此科学家们从上世纪90年代就开始进行基因治疗试验[2-3]，但随之发生的由于受试者对腺病毒载体的致命免疫反应而导致死亡的“杰辛格事件”[4-5]，以及由于逆转录病毒的异常整合诱发患者白血病的恶性事件[6]，人们对病毒性载体的安全性质疑极为强烈。病毒型载体虽然转染效率高，但它具有诸多缺陷，如毒性大、免疫反应强烈、基因容量小、靶向性差、制备过程复杂等[7] ......