付晓霞，罗云梅，刘 娟，刘 杰，李利生

    (1.遵义医学院 基础药理教育部重点实验室暨特色民族教育部国际合作联合实验室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院附属医院 临床医学研究所，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    淫羊藿苷对CX3CL1诱导的单核细胞向人脐静脉内皮细胞迁移和黏附的影响及机制研究

    付晓霞1，罗云梅1，刘 娟2，刘 杰1，李利生1

    (1.遵义医学院 基础药理教育部重点实验室暨特色民族教育部国际合作联合实验室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院附属医院 临床医学研究所，贵州 遵义 563099)

    目的 研究淫羊藿苷(icariin，ICA)对CX3CL1诱导的单核细胞(THP-1)向人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移和黏附的影响及其机制。方法 采用Transwells联合培养THP-1和HUVECs，CX3CL1诱导THP-1向HUVECs迁移和黏附模型，并观察ICA(10-8、10-7、10-6mol/L)对该模型的影响。ICA预给药4 h后加入CX3CL1(50 ng/mL)继续培养24 h，移除Transwells及上室中的THP-1细胞，收集培养液并对迁移至下室的THP-1计数；免疫荧光双标法检测THP-1向HUVECs黏附的情况；Western blot检测CX3CR1、p-NF-κB p65和TNF-α蛋白水平。结果 与对照组比较，CX3CL1诱导THP-1向HUVECs迁移和黏附的数量明显增多(P1 材料与方法

    1.1 主要试剂及仪器 HUVECs和THP-1由湘雅医院中心实验室提供；ICA (经HPLC检测纯度≥98%)购自南京泽朗医药科技有限公司；胎牛血清(FBS)购自Gibco公司；1640培养基购自Hyclone公司；Transwells购自美国Corning公司；重组人CX3CL1购自美国Peprotech公司；BCA和ECL发光剂购自江苏碧云天生物技术研究所；兔多克隆抗体CX3CR1、兔多克隆抗体 IκB-α、小鼠单克隆抗体CD14、TNF-α购自美国Abcam公司；兔多克隆抗体p-NF-κB p65，兔多克隆抗体NF-κB p65购自美国Cell Signaling Technology公司；兔抗Ⅷ因子抗体购自北京博奥森生物技术有限公司；HRP标记的GAPDH抗体购自中国康成生物技术有限公司。

    全波长酶标仪(型号：Multiskan)，美国Thermo scientific公司；凝胶成像系统(型号：Chemi Doc XR5) ......