杨小飒，刘冬莹，李 杰，衣泰龙，涂 悦，程世翔

    (1.武警后勤学院附属医院 脑科医院，天津 300162；2.天津市神经创伤修复重点实验室，天津 300162；3.武警天津总队第六支队卫生队，天津 300410)

    临床医学研究

    哇巴因对人胶质瘤U87-MG细胞增殖及HIF-1α表达的影响

    杨小飒1,2，刘冬莹3，李 杰1，衣泰龙1，涂 悦1,2，程世翔1,2

    (1.武警后勤学院附属医院 脑科医院，天津 300162；2.天津市神经创伤修复重点实验室，天津 300162；3.武警天津总队第六支队卫生队，天津 300410)

    目的 探索哇巴因(Ouabain)对人胶质瘤U87-MG细胞增殖和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法 Ouabain(0.05、0.5、2.5、25 μmol/L)作用于U87-MG细胞24 h，MTT法检测吸光度值和细胞活力，Western Blot检测HIF-1α表达量。结果 不同浓度Ouabain干预24 h后U87-MG细胞吸光度值(OD490)与Control组相比，均明显降低(P均1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 人胶质瘤U87-MG细胞(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)，Ouabain(美国Sigma公司)，高糖培养基(DMEM)、胎牛血清和胰蛋白酶(美国Gibco公司)，四甲基偶氮唑盐(MTT)(美国Promega公司)，兔抗人一抗HIF-1α、β-actin(美国Abcam公司)，辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗(美国KPL公司)，化学发光成像系统(美国GE公司，Amersham Imager 600)，酶标仪(美国Thermo fisher公司，51119300)。

    1.2 细胞培养和实验分组 人胶质瘤U87-MG细胞使用DMEM高糖培养基(含10%胎牛血清)置于5% CO2、37℃培养箱进行培养，待细胞汇合度达90%后消化传代，正常培养7 d后进行后续实验。实验分为：正常对照组(control)和Ouabain组(0.05、0.5、2.5、25 μmol/L)，control组不进行Ouabain干预。

    1.3 MTT法检测细胞存活率 将U87-MG细胞以4 000个/孔的密度接种于96孔板中，每组设置4个复孔，常规培养24 h后Ouabain组加入不同浓度Ouabain继续培养24 h，control组细胞加入等体积的DMEM高糖培养基，空白孔仅加入等体积的DMEM高糖培养基，培养相同时间后每孔加入20% MTT ......