袁慧敏，何茳萍，张光亚，张丹丹，陈凤玲

    (1.蚌埠医学院 临床学院，安徽 蚌埠 233030； 2.上海交通大学医学院附属第九人民医院 内分泌科，上海 201900)

    基础医学研究

    OC-STAMP基因过表达载体及稳转细胞系的构建

    袁慧敏1，何茳萍2，张光亚2，张丹丹2，陈凤玲2

    (1.蚌埠医学院 临床学院，安徽 蚌埠 233030； 2.上海交通大学医学院附属第九人民医院 内分泌科，上海 201900)

    目的 构建破骨细胞多次跨膜蛋白(OC-STAMP)基因过表达质粒，体外转染RAW264.7细胞构建稳转细胞系，为进一步研究OC-STAMP的功能提供工具。方法 根据NCBI数据库中OC-STAMP基因信息，设计引物，采用PCR扩增其基因片段; 运用基因重组方法双酶切目的基因，并将其克隆至含有绿色荧光蛋白(GFP)的pCDH-CMV慢病毒载体，经酶切测序对重组质粒进行鉴定；转染成功构建的质粒至293T细胞中Western blotting验证蛋白过表达情况；采用psPAX2和pMD2.G两种包装质粒包装pCDH-CMV-oc-stamp重组质粒获得病毒液，病毒感染RAW264.7细胞获得OC-STAMP过表达稳转细胞系，Q-PCR和Western blotting验证蛋白过表达情况。结果 酶切和测序鉴定表明成功构建pCDH-CMV-oc-stamp的基因重组质粒; 将成功构建的pCDH-CMV-oc-stamp质粒转染至293T，可观察到大量绿色荧光表达; 将成功包装获得的病毒液感染RAW264.7细胞后q-PCR及Western blotting结果证实OC-STAMP成功过表达。结论 成功构建pCDH-CMV-oc-stamp重组质粒及OC-STAMP过表达的稳转细胞系。

    破骨细胞多次跨膜蛋白；质粒构建;病毒转染；RAW264.7细胞

    破骨细胞跨膜蛋白(Osteoclast stimulatory transmembrane protein，OC-STAMP) 是Yang等[1]于2008年在经核因子B受体活化因子配体( receptor activator of nuclear factor-Bligand，RANKL) 诱导后的小鼠巨噬细胞株RAW 264.7细胞及原代骨髓巨噬细胞中发现的一个多次跨膜蛋白。小鼠的OC-STAMP基因位于2号染色体上，与人的同源性和相似性分别为74%和86%。该基因结构上高度保守，蛋白表达广泛，且具有组织特异性，已经证实OC-STAMP在肝脏、心脏及脑等组织中高表达 ......